衰老小鼠睪丸睪酮合成功能障礙的機(jī)制研究.pdf

1、背景：當(dāng)前人口老齡化激發(fā)人們對(duì)于衰老以及衰老相關(guān)疾病研究的極大興趣。臨床資料表明男性衰老過(guò)程中血清睪酮水平下降與性腺機(jī)能減退等疾病發(fā)病相關(guān)。
　　目的：探討衰老相關(guān)的睪酮水平降低的機(jī)制及睪丸組織和附睪脂肪組織氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)睪丸間質(zhì)Leydig細(xì)胞睪酮合成功能的影響。
　　方法：安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心購(gòu)買(mǎi)不同年齡段的C57BL/6J雄性小鼠，分3組：①3個(gè)月齡組（young組，n=8），②12個(gè)月齡組（middle-ag

2、ed組，n=8），③24個(gè)月齡組（aged組，n=8）。處死并解剖小鼠后，一側(cè)睪丸組織做成石蠟切片，免疫組織化學(xué)法觀察 F4/80標(biāo)記的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)情況和3β-HSD的表達(dá)情況；Western blotting分別檢測(cè)附睪脂肪組織中NF-kB，GRP78和抗氧化物 GPx4，MnSOD，睪丸組織中合成睪酮相關(guān)蛋白/酶，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子GRP78,以及SIRT1和抗氧化物MnSOD，GPx4的蛋白表達(dá)情況；Real-time RT-PCR檢

3、測(cè)睪丸組織中合成睪酮相關(guān)蛋白/酶mRNA的表達(dá)，抗氧化物和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.組織學(xué)變化：使用抗3β-HSD單克隆抗體標(biāo)記Leydig細(xì)胞免疫組化染色結(jié)果顯示，Leydig細(xì)胞數(shù)量在三組中沒(méi)有顯著差異，而利用圖像分析軟件IPP6.0分析平均光密度發(fā)現(xiàn)3β-HSD在aged組表達(dá)強(qiáng)度明顯低于young組(p<0.01)。巨噬細(xì)胞特異性抗體F4/80進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示aged組睪丸組

4、織中的巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯高于young組(p<0.01)。
　　2.衰老相關(guān)睪酮合成蛋白酶降低：在睪丸組織中，StAR和 P450scc表達(dá)水平在middle-aged組要顯著低于young組(p<0.05)，在aged組持續(xù)下降。Cyp17a的mRNA表達(dá)水平與young組相比middle-aged組呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，在aged組中出現(xiàn)顯著的下降(p<0.05)。Hsd17b的mRNA表達(dá)水平middle-aged組和aged組較yo

5、ung組呈顯著下降(p<0.05)。
　　3.衰老過(guò)程中小鼠睪丸組織抗氧化系統(tǒng)功能降低：SIRT1蛋白表達(dá)從 middle-aged組開(kāi)始降低，到aged組降低的程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。同時(shí)與young組比較，aged組和middle-aged組中Sirt1的mRNA水平明顯降低(p<0.05)。在睪丸組織中，MnSOD和 GPx4蛋白的表達(dá) middle-aged組低于young組(p<0.05)，aged組較midd

6、le-aged組繼續(xù)下降(p<0.05)。Sod2和 Gpx4的 mRNA水平在 aged組和middle-aged組中要明顯低于young組(p<0.05)。
　　4.衰老小鼠睪丸組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志表達(dá)上調(diào)：middle-aged組GRP78蛋白的表達(dá)較young組顯著升高，aged組較middle-aged組顯著增高(p<0.05)。Grp78和Chop的mRNA水平表現(xiàn)相似的趨勢(shì)。
　　5.衰老小鼠附睪脂肪組織抗氧化系

7、統(tǒng)功能降低，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志和 NF-kB表達(dá)上調(diào)：aged組抗氧化物MnSOD和GPx4的表達(dá)低于young組(p<0.05)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志GRP78和促炎因子NF-kB在aged組中表達(dá)顯著增高(p<0.05)。
　　結(jié)論:本課題研究結(jié)果表明老年小鼠睪丸組織睪酮合成相關(guān)蛋白/酶表達(dá)減少與衰老相關(guān)睪酮水平降低有關(guān)，睪丸組織和附睪脂肪組織中存在的氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及炎性反應(yīng)可能是引起衰老相關(guān)的睪丸Leydig細(xì)胞睪酮合成能力減低