蟲草素衍生物三乙酰基-3-羥基苯基腺苷對apoE---小鼠早期動脈粥樣硬化病變影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 進(jìn)行蟲草素衍生物三乙?；?3-羥基苯基腺苷(Triacetyl-3-hydroxyphenyladenosine,THPA)抗apoE-/-小鼠早期動脈粥樣硬化的實驗,探討三乙?；?3-羥基苯基腺苷對apoE-/-小鼠早期動脈粥樣硬化病變的影響及其可能的作用機制。
　　 方法:
　　 本實驗選用中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所的51只雄性apoE-/-小鼠。5周齡時,將小鼠隨機分成5組,模型對照組(n=

2、11);辛伐他汀組(5mg/kg/d)(n=10);THPA治療組(2.5,5,10mg/kg/d)(n=10,每組10只)。5組實驗動物分別喂養(yǎng)促動脈粥樣硬化的高脂飼料(15.8％脂肪和1.25％膽固醇,北京華阜康生物科技股份有限公司)、添加羧甲基纖維素鈉(CarboxylmethylCellulose,CMC)、辛伐他汀或不同劑量的THPA共6周。CMC溶劑、辛伐他汀和不同劑量的THPA每天通過灌胃給予實驗動物。治療6周后,禁食12

3、小時并麻醉,經(jīng)內(nèi)眥靜脈取血,使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血漿中總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)等血清學(xué)指標(biāo)。
　　 解剖并分離主動脈弓,油紅O內(nèi)膜染色,進(jìn)行斑塊面積評估。主動脈根部靠近心底的部位用于連續(xù)冰凍切片的制作,冰凍切片的厚度為8μm,切片開始的部位為主動脈根部主動脈瓣開始出現(xiàn)處,直至主動脈瓣膜完全消失。每只鼠平均收集45張切片,抽取其中5張(每

4、間隔8張抽一張)用于油紅O染色并進(jìn)行亮綠復(fù)染,計算脂質(zhì)染色陽性面積(μm2),用Image-ProPlussoftware6.0(MediaCybemetics)對斑塊面積進(jìn)行量化統(tǒng)計分析。心底主動脈根部剩余的40張切片用于免疫組化,檢測病變部位炎癥相關(guān)因子VCAM-1、TF、LOX-1、NF-κB的表達(dá)及與內(nèi)皮保護(hù)相關(guān)的因子iNOS、eNOS的表達(dá)。所得全部數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0軟件。
　　 結(jié)果:
　　 1、血

5、脂:不同劑量的THPA治療6周后和模型組相比血漿總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇的水平未有顯著性變化。而血漿高密度脂蛋白膽固醇的水平在各劑量THPA治療組較模型組均顯著降低(p＜0.01)。
　　 2、主動脈弓內(nèi)膜油紅O染色:不同劑量的THPA治療組均能顯著抑制動脈粥樣硬化斑塊的形成,2,5、5.0和10mg/kgTHPA治療組與模型組相比病變面積分別減少47％、45％和43％。
　　 3、心底主動脈瓣處冰凍切片油

6、紅O染色:與模型組相比,2.5、5.0和10mg/kg劑量的THPA均顯著抑制主動脈瓣膜處動脈粥樣硬化病變的形成,斑塊面積分別減少40％、33％和35％。
　　 4、炎癥相關(guān)因子:經(jīng)THPA治療后,THPA各治療組炎癥相關(guān)因子VCAM-1、TF、NF-KB、LOX-1的表達(dá)較模型組明顯降低(P值均＜0.01),不同劑量THPA治療組與辛伐他汀組以及THPA各治療組之間炎癥相關(guān)因子VCAM-1、TF、NF-κB、LOX-1表達(dá)無顯

7、著性差異(P值均＞0.05)。
　　 5、與內(nèi)皮保護(hù)相關(guān)的因子(iNOS、eNOS):THPA各治療組iNOS表達(dá)明顯低于模型組(P值均＜0.01),THPA各治療組eNOS表達(dá)明顯高于模型組(P值均＜0.01),不同劑量THPA治療組與辛伐他汀組以及THPA各治療組之間iNOS、eNOS的表達(dá)無顯著性差異(P值均＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、THPA在apoE-/-模型鼠上可以有效減輕動脈粥樣硬化病變