雜色鮑若干免疫相關基因的克隆和分析.pdf

1、雜色鮑（Haliotis diversicolor supertexta，small abalone）是我國極為重要的養(yǎng)殖貝類之一，然而近年來養(yǎng)殖過程中病害頻發(fā)，已成為產業(yè)發(fā)展的瓶頸之一。研究雜色鮑免疫相關基因，對于解釋雜色鮑的抗病機理、探索病害防治新途徑從而保證鮑養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展具有重要的意義。
　　 本研究結合EST序列分析和SMART RACE技術克隆獲得雜色鮑巨噬細胞移動抑制因子（macrophage migrati

2、on inhibitory factor，samif）、皮膚橋蛋白2（dermatopontin 2，sadpt2）、β葡聚糖識別蛋白（β-1,3-glucan recognition protein，saβgrp）基因的全長Cdna序列和肽聚糖識別蛋白（peptidoglycan recognition protein，sapgrp）基因三個亞型的Cdna序列片段，同時采用PCR技術克隆獲得雜色鮑mif的全長基因組DNA，head t

3、o toe PCR技術檢測全長Cdna序列的正確性，并采用實時定量PCR技術分析雜色鮑經副溶血弧菌（Vibrio Parahaemolyticus）感染后和在環(huán)境有機污染物三丁基錫（tributyltin，TBT）暴露下samif、sadpt2、saβgrp基因的表達情況。結果如下：（1）samif的Cdna全長為535 bp，開放閱讀框編碼128個氨基酸，預測分子量為14 kDa?；蚪MDNA長3237 bp，包含三個外顯子和兩個內含

4、子。實時定量PCR顯示，samif在肝胰腺、肌肉、卵巢、鰓、外套膜和上足等6個組織中為組成性表達，其中在肝胰腺的表達量最高（p<0.01）；此外，在肝胰腺中24 h和48 h的弧菌組samif的表達水平極顯著高于對照組（p<0.01），TBT暴露后雜色鮑肝胰腺的mif基因表達未見顯著性變化（p>0.05）。（2）sadpt2的Cdna全長為584 bp，包括58 bp的5’非編碼區(qū)，471 bp的開放閱讀框，55 bp的3’非編碼區(qū)。S

5、adpt2開放閱讀框編碼156個氨基酸，預測分子量為18.3 kDa。經副溶血弧菌誘導后，肝胰腺中的sadpt2基因在24 h時顯著高于對照組（p<0.05），表明它為一種免疫誘導蛋白，參與機體對副溶血弧菌的免疫防御。TBT暴露后，雜色鮑肝胰腺的dpt2基因表達未見限制性變化（p>0.05）。（3）獲得的1459 bp saβgrp全長Cdna含一個987 bp ORF，編碼328個氨基酸，預測分子量為36.9 kDa。與現有報道的β-

6、1,3-葡聚糖識別蛋白均含信號肽不同，本研究所獲得的雜色鮑Βgrp不含信號肽，為非分泌型蛋白。實時定量PCR分析表明：經副溶血弧菌誘導后，24 h的實驗組saβgrp的表達水平極顯著高于對照組（p<0.01），48 h的實驗組saβgrp基因顯著高于對照組（p<0.05）。TBT暴露后，雜色鮑肝胰腺的βgrp基因表達未見顯著性變化（p>0.05）。（4）雜色鮑pgrp基因三個亞型的Cdna序列片段，分別長804 bp、1015bp和72