連翹酯苷A抑制破骨細(xì)胞分化的機(jī)制探討及其治療應(yīng)用.pdf

1、目的:破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞分化的平衡對于維持著機(jī)體骨骼正常生理功能。破骨細(xì)胞的紊亂是骨質(zhì)疏松癥和炎性骨溶解的病因之一。探索這些疾病背后的機(jī)制，尋求控制破骨細(xì)胞分化的新靶點(diǎn)具有重要的意義。
　　方法:為了探究FT-A在炎性骨溶解以及破骨細(xì)胞分化中的作用，我們首先構(gòu)建了LPS誘導(dǎo)的小鼠顱骨骨溶解模型，運(yùn)用microCT以及組織學(xué)分析進(jìn)行驗(yàn)證。隨后通過體外破骨細(xì)胞分化，主要通過熒光定量PCR、Western blot、染色以及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染等手

2、段來探究FT-A對破骨細(xì)胞分化的作用及內(nèi)在機(jī)制。最后構(gòu)建了OVX誘導(dǎo)的小鼠骨質(zhì)疏松模型來驗(yàn)證FT-A的保護(hù)作用。
　　結(jié)果:我們首先發(fā)現(xiàn)連翹酯苷A(FT-A)通過抑制破骨細(xì)胞的形成或募集來抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠顱蓋骨細(xì)胞溶解。在體外實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)FT-A抑制破骨細(xì)胞分化和骨吸收，并在體外下調(diào)破骨細(xì)胞標(biāo)記基因的表達(dá)，包括C-FOS和NFATC1。FT-A主要通過抑制TRAF6的Lys63多聚泛素化，IκBcc的降解和P65的入核來抑

3、制RANKL誘導(dǎo)的NF-κB信號通路的傳導(dǎo)，進(jìn)而抑制了破骨細(xì)胞的分化。隨后我們在BMMs中轉(zhuǎn)染入持續(xù)激活的P65質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)可以部分挽救FT-A介導(dǎo)的破骨細(xì)胞抑制。進(jìn)一步探究中，F(xiàn)T-A同時誘導(dǎo)了NICD的降解，增加了RBPJK的表達(dá)量，使得RBPJK作為轉(zhuǎn)錄抑制因子抑制NFATc1的表達(dá)。我們運(yùn)用RNAi將RBPJK的蛋白沉默掉之后，通過TRAP染色，可以發(fā)現(xiàn)破骨細(xì)胞分化的水平顯著增加。此外，我們構(gòu)建了卵巢切除誘導(dǎo)的小鼠骨質(zhì)疏松模型，也