TIEG特異的RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定.pdf

1、細胞外基質(zhì)(extracellular matrix ECM)過度聚集是腎間質(zhì)纖維化的病理基礎(chǔ)。在腎間質(zhì)纖維化進程中，腎小管上皮細胞向肌成纖維母細胞轉(zhuǎn)分化及細胞外基質(zhì)合成增加起著至關(guān)重要的作用。眾多的研究證明轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF—β)是最強的致纖維化生長因子，與多種纖維化相關(guān)疾病的發(fā)病密切相關(guān)。TGF—β的生物學(xué)效應(yīng)主要通過細胞內(nèi)Smad信號蛋白介導(dǎo)，其中受體調(diào)節(jié)Smad(Smad2，Smad3)發(fā)揮正性調(diào)節(jié)作用，抑制性Smad(S

2、mad7)發(fā)揮負性調(diào)節(jié)作用。前期的研究表明采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)上調(diào)Smad7表達，可有效抑制高糖和糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化及細胞外基質(zhì)合成。因此， TGF—β／Smad信號通路可作為防治腎間質(zhì)纖維化的潛在靶位。 TIEG(TGF—β誘導(dǎo)早期基因)蛋白屬于SP1樣蛋白家族的新成員，是TGF—β誘導(dǎo)的早期轉(zhuǎn)錄因子蛋白，參與調(diào)節(jié)TGF—β靶基因的表達。TIEG的這種效應(yīng)主要源于對Smad信號蛋白的調(diào)節(jié)作用：一方面TIEG能夠

3、與Smad7啟動子中的GC序列相結(jié)合，抑制負反饋調(diào)節(jié)因子Smad7表達；另一方面通過促進受體調(diào)節(jié)性Smad2的表達。TIEG增強TGF—β／Smad信號通路正性調(diào)節(jié)作用，和減弱負性調(diào)節(jié)作用的雙重作用，對TGF—β／Smad信號通路活化發(fā)揮著顯著的增強效應(yīng)。因此，通過下調(diào)TIEG表達抑制TGF—β／Smads信號通路活化，可望抑制或阻斷糖尿病腎病腎間質(zhì)纖維化進程，改善糖尿病腎病的預(yù)后。本課題擬通過RNA干擾技術(shù)沉默TIEG基因，為后期構(gòu)建