發(fā)酵酒中干紅葡萄酒飲用后的鑒別技術(shù)研究.pdf

1、目的：
　　 1.通過(guò)文獻(xiàn)查詢干紅葡萄酒中具有鑒別意義的特征性物質(zhì)；
　　 2.建立干紅葡萄酒特征性物質(zhì)的UPLC-MSn的檢測(cè)方法；
　　 3.建立干紅葡萄酒特征性物質(zhì)的提取凈化方法，并比較不同提取凈化方法的回收率，以選擇最優(yōu)的方法；
　　 4.分別對(duì)各類發(fā)酵酒（包括啤酒、干紅葡萄酒和白酒）及飲料進(jìn)行檢測(cè)，確認(rèn)所選特征性物質(zhì)能用來(lái)鑒別各種酒類及飲料，為飲酒后導(dǎo)致的各類案件的檢材采取、檢測(cè)、結(jié)果分析及法醫(yī)

2、學(xué)鑒定提供科學(xué)依據(jù)；
　　 5.研究飲酒后，通過(guò)對(duì)生物檢材（包括唾液、尿液和血液）中特征性物質(zhì)的檢測(cè)，推斷是否飲用過(guò)干紅葡萄酒。
　　 方法：
　　 1.通過(guò)文獻(xiàn)查新了解各種發(fā)酵酒中微量物質(zhì)的差異以及干紅葡萄酒的特征性物質(zhì)，本文選定其特征性物質(zhì)為奎寧酸和白藜蘆醇；
　　 2.對(duì)檢材預(yù)處理后，采用WatersOasia@MAX3cc(200mg)固相萃取小柱對(duì)檢材進(jìn)行提取凈化，采用AcquityUPLC@B

3、EHC181.7μm柱做為液相色譜柱，電噴霧電離負(fù)離子(ESI)對(duì)檢材進(jìn)行UPLC-MSn檢測(cè)。
　　 3.選取常見(jiàn)干紅葡萄酒、白酒、啤酒及飲料做為檢材，通過(guò)對(duì)檢材提取凈化處理后，檢測(cè)其奎寧酸和白藜蘆醇的含量。
　　 4.人體飲用各種發(fā)酵酒后，通過(guò)對(duì)人體生物檢材（血液、尿液、唾液）中干紅葡萄酒的特征性物質(zhì)的檢測(cè)，甄別是否飲用過(guò)干紅葡萄酒。
　　 結(jié)果：
　　 1.分別以空白血中奎寧酸和白藜蘆醇的濃度為橫坐

4、標(biāo)，其峰面積為縱坐標(biāo)作圖。測(cè)得奎寧酸的典型工作曲線回歸方程為：y=100x-2.5167，y=0.9999，n=6，線性范圍為1.25μg/ml-20.0μg/ml，最低檢出限為1.01μg/ml。白藜蘆醇的典型工作曲線回歸方程為：y=400.19x-45.579，y=0.9998，n=6，線性范圍為1.25μg/ml-20.0μg/ml，最低檢出限為0.83μg/ml
　　 2.本文所建立的方法，適用于血液、唾液和尿液檢材。<

5、br>　　 3.通過(guò)對(duì)常見(jiàn)干紅葡萄酒、白酒、啤酒及飲料的檢測(cè)，測(cè)得干紅葡萄酒中均含有奎寧酸和白藜蘆醇，而白酒和啤酒中未檢測(cè)到二者的存在。飲料中美之源中檢測(cè)到白藜蘆醇，未檢測(cè)到奎寧酸。統(tǒng)一葡萄多中二者均未檢測(cè)到。
　　 4.人飲用干紅葡萄酒后，其檢材血液、唾液、尿液中均未檢測(cè)到奎寧酸和白藜蘆醇。
　　 結(jié)論：
　　 1.采用AcquityUPLC@BEHC181.7μm的色譜柱，發(fā)現(xiàn)奎寧酸和白藜蘆醇出峰峰形對(duì)稱性

6、良好，出峰效果比HILIC柱好，因此本文所建方法采用AcquityUPLC@BEHC181.7μm的色譜柱。UPLC-MSn條件優(yōu)化后建立的方法，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，能達(dá)到定性定量分析的要求。
　　 2.本實(shí)驗(yàn)采用MAX柱和C18柱分別做為固相萃取小柱，平行操作，發(fā)現(xiàn)MAX柱比C18柱回收率高，重現(xiàn)性好。因此本文采用MAX柱為固相萃取小柱對(duì)檢材進(jìn)行提取凈化。采用固相萃取對(duì)樣品提取凈化時(shí)不需要衍生化處理，方法建立后

7、適用于生物檢材的快速檢測(cè)。
　　 3.本實(shí)驗(yàn)采用固相萃取技術(shù)對(duì)檢材進(jìn)行提取凈化后對(duì)奎寧酸和白藜蘆醇回收率高，尤其對(duì)于要求檢材干凈、雜質(zhì)少的UPLC-MSn方法更為適用。結(jié)合LTQXL線性離子阱質(zhì)譜的高靈敏度特性，可以檢測(cè)出檢材中的微量特征性物質(zhì)。
　　 4.不同種類葡萄酒中含有不同量的奎寧酸和白藜蘆醇，但是本文所檢測(cè)的紅星二鍋頭、藍(lán)帶啤酒中卻未檢測(cè)到二者，這說(shuō)明本文所建立的方法可應(yīng)用于發(fā)酵中中紅酒、白酒及啤酒的鑒別區(qū)分。

8、
　　 5.不同產(chǎn)地、不同品種的葡萄釀制的葡萄酒中奎寧酸和白藜蘆醇的含量不同。
　　 6.統(tǒng)一葡萄多中含有葡萄汁，但是卻檢測(cè)不到奎寧酸和白藜蘆醇，可能是由于飲料中的其他添加劑影響了奎寧酸和白藜蘆醇的存在形式。
　　 7.本實(shí)驗(yàn)志愿者飲用干紅葡萄酒后，檢材血液、尿液、唾液中均未檢測(cè)出奎寧酸和白藜蘆醇。其原因有可能是酒中奎寧酸和白藜蘆醇含量少，而且飲酒量少，所以進(jìn)入人體后檢材中二者含量小于儀器可檢測(cè)的最小濃度；或者可