日糧鋅對熱暴露引起的小鼠及巴馬香豬睪丸損傷的影響.pdf

1、熱應(yīng)激引起雄性生殖器官功能損傷，導(dǎo)致精子活力、頂體完整率下降和精子畸形率升高，使精液品質(zhì)和繁殖能力降低。同時熱應(yīng)激會引起睪丸組織活性氧的產(chǎn)生和代謝的不平衡，從而誘導(dǎo)睪丸氧化應(yīng)激。鋅作為一種重要的微量元素，不僅具有促生長和抗氧化作用，同時也具有生殖保護作用。本研究以雄性小鼠和巴馬小香豬為研究對象，對其進行預(yù)飼添加不同鋅濃度日糧，繼而進行熱暴露處理，通過觀察各組小鼠、巴馬小香豬睪丸組織的顯微結(jié)構(gòu)，檢測分析睪丸組織的抗氧化水平、Cu-Zn S

2、OD蛋白、Nrf2-Keap1/ARE通路中相關(guān)基因以及與自噬相關(guān)的P62蛋白、基因的表達(dá)變化，研究日糧鋅對熱暴露引起的雄性小鼠和巴馬香豬生殖損傷的保護作用，為全面評價日糧鋅對生殖損傷的保護機制提供科學(xué)的理論依據(jù)。主要研究如下:
　　1、日糧鋅對熱暴露小鼠睪丸損傷的影響
　　選用24只8周齡的ICR雄性小鼠，隨機分為2組，每組12只。飼喂正常鋅和添加鋅250 mg/kg兩種鋅濃度的飼料，自由采食和飲水。飼喂一個月后，每組隨機

3、選取6只進行連續(xù)8d，每天2h，40-42℃的全身熱暴露，并在每天熱暴露后稱其體重及采食量。最后一次熱暴露后，采集各小鼠的睪丸組織樣品進行形態(tài)學(xué)觀察、抗氧化指標(biāo)的測定以及Cu-Zn SOD、Nrf2蛋白的表達(dá)。試驗結(jié)果表明，各組小鼠間體重、平均日增重均沒有顯著性差異(P＞0.05)，平均日采食量在正常鋅熱暴露組顯著降低(P＜0.05)，但在加鋅熱暴露組中顯著升高(P＜0.05);睪丸指數(shù)在正常鋅熱暴露組中顯著提高(P＜0.01)，同時在

4、加鋅熱暴露組中顯著下降(P＜0.01);熱暴露組睪丸組織結(jié)構(gòu)不完整，生精小管脫落，排列不整齊;睪丸組織Cu-Zn SOD含量在正常鋅熱暴露組中顯著降低(P＜0.01)，而H2O2、 GPX和γ-GCS含量在各組間均無顯著性差異(P＞0.05);Western blot結(jié)果顯示，正常鋅組在熱暴露后，睪丸組織中Cu-Zn SOD蛋白表達(dá)量極顯著降低(P＜0.01)，加鋅熱暴露組也降低其表達(dá)，但極顯著的高于正常鋅熱暴露組(P＜0.01);睪丸

5、細(xì)胞核Nrf2蛋白表達(dá)量與正常鋅非熱應(yīng)激組相比，熱暴露組，加鋅組以及加鋅熱暴露組中都極顯著地升高(P＜0.01)。上述試驗結(jié)果表明，熱暴露引起雄性小鼠睪丸組織產(chǎn)生氧化損傷，同時，加鋅可通過激活Cu-Zn SOD緩解這種損傷。
　　2、日糧鋅對熱暴露巴馬香豬生長性能的影響
　　選用24頭6月齡的雄性巴馬小香豬，隨機分為2組，每組12頭。飼喂正常鋅和添加鋅1500 mg/kg兩種鋅濃度的飼料，自由采食和飲水。一個月后每組隨機選取

6、6頭進行連續(xù)8d，每天5h，40℃的全身熱暴露，并在熱暴露的第1、4和8天對所有香豬進行頸動脈采血以及體重、采食量的統(tǒng)計。最后一次熱暴露后，采集血液及各臟器，進行鋅含量、血液生化指標(biāo)及激素的測定。試驗結(jié)果顯示:加鋅使體增重、平均日增重和飼料轉(zhuǎn)換率都顯著升高(P＜0.05);加鋅組豬的脾臟指數(shù)顯著低于正常鋅組(P＜0.05)，但其他臟器指數(shù)都無顯著性變化(P＞0.05);在1500 mg/kg加鋅組中，血清、心臟、腎臟、睪丸、附睪、毛發(fā)、

7、背最長肌和糞便中鋅的含量顯著升高(P＜0.05)，同時熱暴露血清中鋅的含量顯著低于非熱應(yīng)激組(P＜0.05);熱暴露第1天，與非熱暴露組相比，正常鋅熱暴露組血清睪酮水平極顯著升高(P＜0.01)。上述結(jié)果表明，預(yù)飼額外添加鋅1500 mg/kg的飼料，可一定程度地緩解熱暴露引起的巴馬香豬血清鋅濃度的降低，并提高生產(chǎn)性能。
　　3、日糧鋅對熱暴露巴馬香豬睪丸氧化損傷的保護機制
　　選用24頭性成熟的雄性巴馬小香豬，隨機分為2組

8、，每組12頭。飼喂正常鋅和添加鋅1500 mg/kg兩種鋅濃度的飼料，自由采食和飲水，飼喂一個月后，每個濃度隨機選取6頭進行連續(xù)8d，每天5h，40℃的全身熱暴露。最后一次熱暴露后，采集睪丸組織。試驗結(jié)果顯示:正常鋅組熱暴露后，MDA水平顯著升高(P＜0.05)，加鋅熱暴露組中Cu-Zn SOD顯著低于非熱暴露組(P＜0.05);HE染色結(jié)果顯示正常鋅熱暴露引起生精小管脫落，間質(zhì)輕微松散;免疫組化結(jié)果顯示加鋅可顯著增強睪丸間質(zhì)細(xì)胞中AR

9、、Cu-Zn SOD和P62蛋白的表達(dá)，同時熱暴露會減弱前兩者的表達(dá)量，但熱暴露和加鋅都可使P62蛋白表達(dá)顯著增強;熱暴露使Nrf2的調(diào)控基因NQO1和GCLC mRNA表達(dá)水平在正常鋅組中極顯著升高(P＜0.01)，而加鋅并不影響其表達(dá)量，但加鋅熱暴露可引起P62 mRNA水平極顯著升高(P＜0.01)。上述結(jié)果表明，飼喂1500 mg/kg加鋅日糧可通過激活Nrf2-Keap1/ARE通路，一定程度地緩解熱暴露引起的睪丸氧化損傷，但