通絡(luò)益腎湯對(duì)高糖誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞GRP78、Caspase-12表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察通絡(luò)益腎湯含藥血清對(duì)高糖培養(yǎng)下大鼠腎小球系膜細(xì)胞(MC)增殖、凋亡及GRP78mRNA、Caspase-12 mRNA表達(dá)的影響，從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激角度，探討通絡(luò)益腎湯保護(hù)腎臟的作用及機(jī)制。
　　方法:將體外培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞隨機(jī)分為6組，分別設(shè):正常組(5.6mmol/L葡萄糖+10％的胎牛血清)、模型組（30 mmol/L葡萄糖+10％空白大鼠含藥血清）、通絡(luò)益腎湯大劑量組(30mmol/L葡萄糖+通絡(luò)益腎湯大劑量1

2、0％的含藥血清)、通絡(luò)益腎湯中劑量組（30mmol/L葡萄糖+通絡(luò)益腎湯中劑量10％的含藥血清）、通絡(luò)益腎湯小劑量組（30mmol/L葡萄糖+通絡(luò)益腎湯小劑量10％的含藥血清及西藥組(30mmol/L葡萄糖+洛汀新、糖適平10％的含藥血清)，置于37℃，5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中，分別培養(yǎng)12 h、24 h、48 h和72 h后，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)各組系膜細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組系膜細(xì)胞凋亡情況，RT-PCR法檢測(cè)各

3、組系膜細(xì)胞GRP78mRNA、Caspase-12 mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:①M(fèi)TT結(jié)果顯示:與正常組相比，模型組腎小球MC在各時(shí)間點(diǎn)均有明顯增殖，差異顯著(p＜0.05或p＜0.01);與模型組比較，通絡(luò)益腎湯大劑量組、中劑量組、小劑量組在24h、48h、72h均能明顯抑制MC增殖（均p＜0.01），其中以大劑量組效果最佳(p＜0.01):西藥組MC增殖在12h、24h低于中藥大劑量組(均p＜0.05)，而在48h、72

4、h兩組之間無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。②RT-PCR結(jié)果顯示:與正常組比較，模型組的細(xì)胞凋亡率在24 h、48 h和72h時(shí)明顯上升（均p＜0.01）;與模型組比較，通絡(luò)益腎湯大、中、小劑量組MC凋亡率在24h、48 h和72 h時(shí)均小于模型組(p＜0.01)，尤以大劑量組細(xì)胞凋亡率最低，呈劑量依賴性關(guān)系;與西藥組相比，中藥大劑量組在24h、48h、72h時(shí)MC凋亡率均明顯低于西藥組(p＜0.01)，尤以72h細(xì)胞凋亡率更低，提示中藥

5、在后期更能明顯抑制MC凋亡。③GRP78 mRNA檢測(cè)結(jié)果顯示:與正常組比較，模型組MC GRP78 mRNA表達(dá)在12 h時(shí)無(wú)明顯差異(p＞0.05)，24 h開(kāi)始升高(p＜0.05)，48h時(shí)達(dá)高峰(p＜0.01)，而72 h時(shí)明顯下降(p＜0.01);與模型組不同，通絡(luò)益腎湯大、中、小劑量及西藥組GRP78 mRNA在24 h、48 h、72h持續(xù)升高(p＜0.05或p＜0.01)，但在48 h、72h均顯著低于同時(shí)點(diǎn)模型組（均p

6、＜0.01）;與西藥組比較，中藥大、中、小劑量組GRP78 mRNA表達(dá)在48 h、72h均明顯低于同時(shí)點(diǎn)西藥組（p＜0.05或p＜0.01），表明通絡(luò)益腎湯可下調(diào)GRP78mRNA的表達(dá)。④Caspase-12 mRNA檢測(cè)結(jié)果顯示:與正常組比較，模型組Caspase-12 mRNA表達(dá)在48 h、72h時(shí)明顯增加（均p＜0.01）。與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，各給藥組Caspase-12 mRNA表達(dá)在12 h、24 h時(shí)均無(wú)差異(p＞0

7、.05);在48 h、72 h明顯下降（p＜0.01或p＜0.05）。與西藥組比較，通絡(luò)益腎湯中劑量、大劑量組Caspase-12 mRNA表達(dá)在48h、72h均明顯下降（p＜0.01或p＜0.05），中藥大劑量組抑制Caspase-12 mRNA表達(dá)更顯著(p＜0.01)，呈劑量依賴性。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，各給藥組MC隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，其Caspase-12 mRNA表達(dá)從24h、48h到72h呈時(shí)間依賴性增加。
　　結(jié)論:高糖培養(yǎng)條件