微泡介導聲輻射力增強MSCs歸巢修復血管內(nèi)皮的實驗研究.pdf

1、第一部分靶向微泡-干細胞復合體的制備
　　目的：制備一種新型靶向微泡-干細胞復合體。
　　方法：采用“生物素-親和素”橋連法構(gòu)建攜抗ICAM-1抗體的靶向微泡(MBICAM-1)。用帶正電荷的多聚賴氨酸(PLL)對MBICAM-1進行包覆和修飾，使靶向微泡表面帶正電荷。采用靜電吸附法將PLL修飾的MBICAM-1與兔骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)共同孵育，制備MBICAM-1-MSCs復合體，流式細胞儀檢測靶向微泡與MSCs的

2、結(jié)合率。
　　結(jié)果：MBICAM-1經(jīng)PLL修飾后，微泡表面帶正電荷，但微泡形態(tài)、粒徑以及與損傷內(nèi)皮細胞(HUVEC)的結(jié)合率與未經(jīng)PLL修飾的MBICAM-1無顯著性差異(P＞0.05)。PLL修飾的MBICAM-1與MSCs結(jié)合形成MBICAM-1-MSCs復合體，且MSCs與MBICAM-1之間的比例為1∶40時，二者之間結(jié)合率達（29.45±2.88）％。
　　結(jié)論：成功制備MBICAM-1-MSCs復合體，當MSC

3、s與MBI CAM-1之間的比例為1∶40時，其結(jié)合率最大。
　　第二部分微泡介導聲輻射力增強MSCs歸巢修復損傷血管內(nèi)皮的研究
　　目的：探討微泡介導聲輻射力增強MSCs歸巢修復損傷血管內(nèi)皮的有效性。
　　方法：將42只雌性新西蘭大白兔，隨機分為對照(C)組6只，實驗組36只。實驗組建立髂動脈球囊損傷模型，術(shù)后隨機分為:手術(shù)(O)組、手術(shù)+超聲輻照(O+US)組、手術(shù)+微泡+超聲輻照(O+MB+US)組、手術(shù)+MSC

4、s(O+M)組、手術(shù)+復合體(O+TM)組、手術(shù)+復合體+超聲輻照(O+TM+US)組。在髂動脈球囊損傷模型建立后即刻，將雄性MSCs或靶向微泡-干細胞復合體移植至損傷動脈內(nèi)孵育30min，超聲輻照組使用功率0.66w，占空比100％頻率為1MHZ的脈沖超聲經(jīng)體外輻照損傷的髂動脈5min。Real-Time PCR檢測血管組織SRY mRNA的表達。另取42只雌性兔做相同的分組處理，用雄性MSCs或靶向微泡-千細胞復合體連續(xù)治療7d，移

5、植后7d、14d、21d、28d取血管組織Real-Time PCR檢測eNOS mRNA的表達。移植后28d取血管組織進行相關指標測定，HE染色檢測血管形態(tài)學改變，免疫組織化學檢測PCNA、CD31、vWF的表達。
　　結(jié)果：細胞移植后即刻，在(O+M)組、(O+TM)組、(O+TM+US)組均可檢測到SRY mRNA的表達，其余各組幾乎無表達(P＜0.05)。(O+TM+US)組較(O+M)組和(O+TM)組表達明顯增加(P＜

6、0.05)。細胞移植后7d、14d、21d、28d均可檢測到eNOS mRNA的表達，與對照組相比，其它各組表達均減少。除對照組外，（O+TM+US）組在各時間段表達量最高，(O+M)組和(O+TM)組次之，(O)組、(O+US)組、(O+MB+US)組最低(P＜0.05)。細胞移植后28d，HE染色(O)組、(O+US)組、(O+MB+US)組內(nèi)膜增生最明顯，(O+M)組、(O+TM)組和(O+TM+US)新生內(nèi)膜面積/中膜面積(IA

7、/MA)、管腔狹窄率均低于(O)組、(O+US)組、(O+MB+US)組，且(O+TM+US)組低于(O+M)組和(O+TM)組(P＜0.05)。同時，PCNA的表達在(O)組、(O+US)組、(O+MB+US)組最高，(O+M)組和(O+TM)組次之，(O+TM+US)組最低(P＜0.05)。CD31和vWF的表達在(O+TM+US)組最高，(O+M)組和(O+TM)組次之，其余各組幾乎無表達(P＜0.05)。
　　結(jié)論：復合體