雌激素對(duì)去勢(shì)及低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠ACE-AngⅡ-AT1軸的影響.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩52頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:缺氧性肺動(dòng)脈高壓(hypoxia induced pulmonary hypertension,HPH)是由于低氧引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,血管內(nèi)皮合成和分泌的各種血管舒張因子平衡失調(diào),導(dǎo)致早期的肺血管收縮(HPV)以及后期的肺血管重建(HPSR)。ACE-AngⅡ-AT1軸除可引起肺小動(dòng)脈收縮外,尚可引起肺血管壁增厚等肺血管重建,在慢性低氧引起肺動(dòng)脈高壓過(guò)程中發(fā)揮了十分重要的作用。雌激素(Estradiol,E2)在肺血管系統(tǒng)起保護(hù)

2、作用的資料日趨增多,因其可以減弱多種刺激引起的肺血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞功能的損傷,有利于改善血管重構(gòu)和舒張血管,但具體機(jī)制目前尚未完全了解。本研究旨在應(yīng)用去勢(shì)大鼠建立長(zhǎng)期慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型,研究在E2干預(yù)下,低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈壓的變化及血漿和肺組織ACE活性、AngⅡ含量、AT1含量的變化。探討E2對(duì)大鼠肺動(dòng)脈高壓的作用及其是否通過(guò)ACE-AngⅡ-AT1軸發(fā)揮作用,為肺動(dòng)脈高壓的E2補(bǔ)充治療提供理論依據(jù)。
 

3、 方法:
  1、建立模型:雌性SD大鼠60只,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。隨機(jī)分為1假手術(shù)組、2去勢(shì)組、3低氧組、4去勢(shì)+低氧組、5去勢(shì)+E2組、6去勢(shì)+低氧+E2組。2組、4組和6組的老鼠,打開(kāi)其腹腔,沿輸卵管找到卵巢,結(jié)扎卵巢下方輸卵管及營(yíng)養(yǎng)血管,切除卵巢,關(guān)閉腹腔,慶大霉素預(yù)防感染,U字縫合皮膚。1組只打開(kāi)腹腔,找到卵巢后不做處理,直接還納,慶大霉素預(yù)防感染,然后縫合。正常飼養(yǎng)1周,待傷口愈合后進(jìn)行低氧。應(yīng)用自制有機(jī)玻璃低氧箱,整個(gè)低

4、氧箱24h持續(xù)供應(yīng)空氣和氮?dú)獾某夯旌蠚怏w,用氧監(jiān)測(cè)控制系統(tǒng)使低氧箱氧濃度控制在(10±0.5)%,CO2濃度低于0.5%。將3組、4組、6組大鼠放于缺氧箱內(nèi)飼養(yǎng),1組、2組、5組大鼠呼吸正??諝猓c低氧大鼠放于同一房間以相同飲食飼養(yǎng)。
  2、長(zhǎng)期低氧大鼠肺動(dòng)脈高壓變化:8周后用右心導(dǎo)管法測(cè)定大鼠平均肺動(dòng)脈壓(mean pulmonary artery pressure,mPAP),稱(chēng)量法計(jì)算右心室肥大指數(shù)(right vent

5、ricule hypertrophy index,RVHI),HE染色進(jìn)行肺小動(dòng)脈重塑(hypoxic pulmonary artery remodeling,HPSR)觀察。
  3、應(yīng)用放射免疫法(radio-immunityassay)測(cè)定大鼠血漿、肺組織中AngⅡ的水平。
  4、應(yīng)用紫外分光光度法(ultravioletspectroscopy)測(cè)定大鼠血清、肺組織中ACE的水平。
  5、應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法(

6、WesternBlot)測(cè)定肺組織中AT1的水平。
  6、應(yīng)用RT-PCR測(cè)定肺組織中AT1mRNA和肺動(dòng)脈ACEmRNA的水平。
  結(jié)果:
  1、成功建立大鼠PAH模型:8周后,低氧條件下的大鼠出現(xiàn)毛色晦暗、虹膜暗紅、呼吸急促、進(jìn)食減少,隨著低氧時(shí)間的延長(zhǎng),大鼠活動(dòng)度逐漸減少,最終以靜臥為主,未出現(xiàn)死亡。與1組比較,3組及4組大鼠體重增長(zhǎng)明顯緩慢;6組大鼠體重增長(zhǎng)速度減緩;2組和5組增長(zhǎng)速度無(wú)明顯變化。與1組比

7、較,3組mPAP明顯升高,符合肺動(dòng)脈高壓的壓力水平;4組大鼠的mPAP更甚;6組大鼠的mPAP雖有所升高,但升高幅度較3組和4組明顯下降;2組、5組mPAP無(wú)明顯變化
  2、長(zhǎng)期低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈及右心室形態(tài)學(xué)變化:8周后,光鏡下,1組大鼠肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞扁平連續(xù),細(xì)胞分布均勻,大小、厚薄較一致,無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞水腫壞死,肺動(dòng)脈管壁結(jié)構(gòu)正常。3組大鼠肺內(nèi)血管壁明顯增厚,肺細(xì)小動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞(SMC)增多,中膜(PAMT)

8、增厚,管腔變窄;4組更甚;6組肺動(dòng)脈管壁結(jié)構(gòu)介于正常組及低氧組之間;2組和5組肺動(dòng)脈管壁結(jié)構(gòu)正常。RV/(LV+SP)比值的變化趨勢(shì)同前
  3、大鼠血清、肺組織AngⅡ含量的變化及大鼠血清、肺動(dòng)脈、肺組織中ACE活性的變化:放射免疫法測(cè)定AngⅡ顯示,與1組相比,2組、3組和4組AngⅡ表達(dá)水平明顯升高,且增加幅度逐組遞增;5組、6組AngⅡ達(dá)水平無(wú)明顯變化。紫外分光光度法測(cè)定ACE顯示,與1組相比,2組、3組和4組ACE表達(dá)水

9、平明顯升高,且增加幅度逐組遞增;5組和6組ACE表達(dá)水平無(wú)明顯差異。RT-PCR分析顯示,與1組相比,2組、3組和4組ACEmRNA表達(dá)水平明顯升高,且增加幅度逐組遞增;5組和6組ACEmRNA表達(dá)水平無(wú)明顯差異。
  4、大鼠肺組織中AT1表達(dá)變化:Westernblot分析表明,與1組相比,2組、3組和4組AT1蛋白表達(dá)水平明顯升高,且增加幅度逐組遞增;5組和6組AT1表達(dá)水平無(wú)明顯變化。應(yīng)用RT-PCR分析顯示,與1組相比,

10、2組、3組和4組AT1mRNA表達(dá)水平明顯升高,且增加幅度逐組遞增;5組和6組AT1表達(dá)水平無(wú)明顯變化。
  結(jié)論:
  1、低氧環(huán)境下,大鼠肺組織中AT1含量明顯增加,大鼠血清、肺組織AngⅡ含量均增高,大鼠血清、肺動(dòng)脈、肺組織中ACE活性升高。
  2、單純?nèi)?shì)大鼠血漿、肺動(dòng)脈和肺組織ACE活性增強(qiáng),AngⅡ合成釋放增多,肺組織AT1蛋白和mRNA表達(dá)均增加。
  3、同單純低氧和單純?nèi)?shì)大鼠相比,低氧環(huán)境下

11、的去勢(shì)大鼠ACE—AngⅡ-AT1軸的活性更高,表現(xiàn)為血漿、肺動(dòng)脈和肺組織ACE活性增強(qiáng),AngⅡ合成釋放增多,肺組織AT1蛋白和mRNA表達(dá)增加。
  4、E2能有效降低低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠、單純?nèi)?shì)大鼠和去勢(shì)+低氧大鼠的肺動(dòng)脈壓力、阻抑右心室肥厚、對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓血管重建具有預(yù)防作用并且能夠抑制ACE-AngⅡ-AT1軸活性。推測(cè)E2對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓血管重建的預(yù)防作用可能部分是通過(guò)下調(diào)肺組織ACE和AT1受體的表達(dá)從而降低

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論