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文檔簡介
1、人類白細(xì)胞抗原(HLA)在抗原遞呈及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)對病毒感染細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞的識別過程中起關(guān)鍵作用。病毒感染細(xì)胞后,通過抗原遞呈途徑最終和HLA I類分子形成病毒抗原肽/HLAI類分子復(fù)合物表達(dá)下細(xì)胞表面,進(jìn)而被特異性的CTL識別并殺傷。為了逃避這種殺傷,有報道某些病毒可以采取一系列的策略干擾抗原遞呈,調(diào)控HLA I類復(fù)合物的表達(dá),導(dǎo)致病毒逃避機(jī)體的抗感染免疫。乙型肝炎病毒感染為全球重要健康問題之一,大約有3億5干萬慢性感染
2、人口,每年死于HBV感染的人數(shù)達(dá)1百萬。我國HBV感染人群比例更大,估計占總?cè)丝诘?0%。HBV感染可出現(xiàn)多種臨床表現(xiàn),包括急性、慢性、重型肝炎,可發(fā)展為肝硬化、肝癌,最終常因肝衰竭或肝癌而死亡。我國原發(fā)性肝癌患者HBV感染率高達(dá)90%,HBV感染者發(fā)生肝癌的概率較無HBV感染者高數(shù)十倍。已有報道及本實(shí)驗室前期研究中發(fā)現(xiàn)肝癌中HLA I類分子表達(dá)較癌旁增加,但其機(jī)制及意義需進(jìn)一步研究。 本實(shí)驗室對肝癌中HLA I類分子表達(dá)上調(diào)的
3、機(jī)制已在多水平作了研究。本研究著重探討肝癌中乙型盯炎病毒(HBV)對HLAI類分子表達(dá)影響及其可能的機(jī)制。 應(yīng)用 PCR 檢測肝癌組織和肝癌細(xì)胞系,HBV 感染情況,流式細(xì)胞儀技術(shù)、RT-PCR 檢測肝癌細(xì)胞系HepG2 和HBV細(xì)胞模型HepG2.2.15(含雙拷貝的HBV全長DNA)HLA I類分子復(fù)合物和轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá);構(gòu)建HBV真核表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染肝痛細(xì)胞系,ELISA檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞HBV抗原分泌情況,RT-PCR、West
4、ern Blot、流式細(xì)胞儀分析HLA I類分子在轉(zhuǎn)錄水平、蛋白質(zhì)水平及細(xì)胞表面復(fù)合物水平的變化。研究結(jié)果表明: 1、應(yīng)用PCR檢測及臨床資料顯示肝癌組織標(biāo)本90%以上存在HBV的感染,而在肝癌細(xì)胞系中檢測不到HBV<,x>基因。選擇肝癌細(xì)胞系HepG2 和HBV細(xì)胞模型HepG2.2.15為研究對象,應(yīng)用流式細(xì)胞儀和RT-PCR檢測,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表而HLA I類復(fù)合物和HLA I類抗原加工遞呈相關(guān)分子表達(dá)均無變化。 2、構(gòu)
5、建了HBV真核表達(dá)質(zhì)粒含HBV全基因組的pcDNA3.1-BV1.0和含1.2拷貝HBV全基因組的pcDNA3.1-HBV1.2,轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系BEL7405后,ELISA檢測HBV抗原的分泌,前者HBsAg為弱陽性,HReAg OD值較低,呈低表達(dá)或不表達(dá);后者HBsAg分泌呈強(qiáng)陽性,HBeAg呈弱陽性。利用流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后BEL7405細(xì)胞表面的HLA I類復(fù)合物的表達(dá),相對于對照空載體,兩個含HBV全基因組的重紕質(zhì)粒均能增加細(xì)
6、胞HLA I類復(fù)合物的表達(dá),而且pcDNA3.1-HBV1.2較pcDNA3.1-HBV1.0增加的更為顯著。RT-PCR和Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后BEL7405細(xì)胞中HLA I類分子及加工遞呈相關(guān)分子表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中TAP I分子增加顯。 3、表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-HBV1.2轉(zhuǎn)染入肝癌細(xì)胞系BEL7405后,上調(diào)細(xì)胞表面HLA I類復(fù)合物,MTT檢測顯示NK92細(xì)胞對其殺傷活性受到一定程度的抑制。
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