CD133抗體對血管損傷修復(fù)機(jī)理的初步研究.pdf

1、前言：
　　心腦血管疾病是一種嚴(yán)重威脅人類，特別是50歲以上中老年人健康的常見病，成為人類死亡的“頭號殺手”。隨著步入老齡化社會，這類疾病的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。隨著血管介入支架治療成為治療的常見手段，其主要并發(fā)癥-支架內(nèi)再狹窄(in-stent restenosis ISR)的發(fā)生，嚴(yán)重制約著手術(shù)的遠(yuǎn)期療效并一直困擾臨床醫(yī)生。由于內(nèi)皮細(xì)胞可在血管腔的表面形成一個抗凝血和抗血栓系統(tǒng)，并維持血液在血管中的正常流動。故第三代生物工程支

2、架的理念是通過攜帶的抗體捕獲外周血中修復(fù)細(xì)胞到支架表面，加速血管自然修復(fù)，恢復(fù)血管內(nèi)皮功能，防止ISR的發(fā)生。
　　目前，利用支架抗體涂層所產(chǎn)生的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)原理，迅速吸附與捕獲外周血中的EPCs，使其到達(dá)損傷血管局部并快速修復(fù)血管內(nèi)皮，在極短時間內(nèi)完成支架內(nèi)皮化，同時恢復(fù)血管內(nèi)皮功能成為三代支架的制備標(biāo)準(zhǔn)。但是如何選擇更具特異性的抗體（如CD34+、CD133+）同時那種涂層更具生物相溶性成為現(xiàn)階段的關(guān)鍵問題。
　　目

3、的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過對抗體涂層血管支架片段在外周血中捕獲HSC的特異性的分析以及捕獲干細(xì)胞的分化結(jié)果分析，評價哪種抗體(CD34+、CD133+)更適宜應(yīng)用于生物工程捕獲支架抗體涂層的制備。
　　方法：
　　分別選用CD34+、CD133+抗體涂層血管支架片段分別置于新鮮肝素抗凝兔血中，之后放入Hoechst33342、CD20、CD7及CD61溶液中孵化，行免疫熒光法以及電鏡掃描(SEM)測定其是否選擇性捕獲特定細(xì)胞

4、。另選用裸金屬支架、CD34+、CD133+抗體涂層血管支架片段植入兔耳動脈內(nèi)通過免疫熒光法測定24h內(nèi)內(nèi)皮化程度。
　　結(jié)果：
　　一、體外抗體涂層支架片段捕獲細(xì)胞分子生物學(xué)結(jié)果
　　CD34抗體涂層血管支架上面有綠色熒光，而CD133抗體涂層血管支架上面無任何熒光。結(jié)果表明:CD133抗體涂層血管支架不捕獲外周血中的髓系祖細(xì)胞。CD34抗體涂層血管支架可捕獲髓系祖細(xì)胞。
　　二、體外捕獲細(xì)胞的形態(tài)學(xué)結(jié)果

5、>　　在外周血中，CD133抗體涂層僅選擇性的捕獲HSC，不捕獲間充質(zhì)干細(xì)胞和造血祖細(xì)胞，其具有較強(qiáng)的增殖分化潛能，對血管修復(fù)具有良好的特異性。CD34抗體涂層抗體涂層在外周血中不但捕獲HSC，還捕獲造血祖細(xì)胞（血管EPCs，髓系祖細(xì)胞和淋巴祖細(xì)胞等），對血管修復(fù)均不具有特異性。并且髓系祖細(xì)胞和淋巴祖細(xì)胞會分化為各種免疫細(xì)胞產(chǎn)生早期炎癥和晚期的排斥反應(yīng)等，血小板可形成“偽膜”，導(dǎo)致血管再狹窄。
　　三、體內(nèi)抗體涂層支架片段捕獲細(xì)胞

6、分子生物學(xué)結(jié)果
　　免疫熒光顯示CD133抗體涂層支架片段可特異性捕獲外周血中EPCs，并在血管內(nèi)皮因子的作用下分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，顯示其良好的耐血流沖刷性和快速內(nèi)皮化效果。
　　結(jié)論：
　　本研究顯示CD133抗體涂層支架片段僅捕獲對Hoeehst33342拒染的干細(xì)胞，不捕獲造血祖細(xì)胞。CD133抗體涂層支架片段在外周血中捕獲更原始的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)，且純度更高，在血管內(nèi)皮因子作用下可分化為內(nèi)皮細(xì)胞，具有耐血