他克莫司質(zhì)量研究和穩(wěn)定性考察.pdf

1、他克莫司(Tacrolimus，F(xiàn)K506)是繼環(huán)孢素A以后的又一細胞因子合成抑制劑。與環(huán)孢素(CsA)相比，他克莫司體內(nèi)外試驗證實其免疫活性為環(huán)孢素A的50～100倍，臨床可有效預防腎移植后急性排斥反應的發(fā)生。他克莫司于1985首次分離獲得，并于1989年試用于臨床以來，取得了良好的評價，現(xiàn)已作為預防、治療排斥反應以及自身免疫性疾病的一線藥物。 l、他克莫司質(zhì)量研究本文通過外觀、光照試驗、引濕性試驗，考察了他克莫司的性狀，證明

2、本品無明顯的引濕性；測定了他克莫司的物理常數(shù)如熔點、溶解度和比旋度，其中熔點與DSC作了比較。 他克莫司主要采用液相色譜保留時間和紅外光譜鑒別，液相色譜保留時間鑒別專屬性強，而紅外光譜證明與本品分子結構中的官能團一致，是原料藥有效的鑒別手段。 由于本品分子結構的特點與發(fā)酵工藝對其質(zhì)量影響的復雜性，有關物質(zhì)的檢查成為本品質(zhì)量研究的重點。首先對有關物質(zhì)檢測系統(tǒng)進行了研究和優(yōu)化，通過等度高效液相色譜柱溫和溶劑的選擇，證明需要較

3、高的柱溫才能有效地檢測他克莫司及其有關物質(zhì)，乙腈作為溶解本品的溶劑將減少樣品在溶劑中異構體的轉化。為了進一步有效分離有關物質(zhì)，在等度系統(tǒng)的基礎上調(diào)整為梯度洗脫的方式，并對流動相的組成、梯度的比例及色譜柱、波長等作了研究，確定了較為優(yōu)化的高效液相色譜檢測有關物質(zhì)的條件，并進行了方法學驗證。驗證參數(shù)包括方法專屬性、溶液穩(wěn)定性和檢測限(10ng)。采用Lc-Ms對本品主要的有關物質(zhì)進行了結構歸屬。試驗表明，用本文建立的HPLC法檢查他克莫司中

4、的有關物質(zhì)，能分離酸、堿、氧化、光照、高溫破壞的降解物并能與工藝過程中各中間體分離，可有效地控制藥品質(zhì)量。對三批樣品中的有關物質(zhì)進行檢測，結果均小于1.096。因本品合成工藝中用乙醇和丙酮為溶劑，故采用氣相色譜頂空進樣法檢查它們的殘留量，方法學研究結果表明，方法的專屬性、重復性和靈敏度均符合測定要求。在此基礎上檢測三批樣品中的有機溶劑殘留量均符合藥典要求。對其他檢查項目如乙醇溶液的澄清度與顏色、結晶水、熾灼殘渣、重金屬、砷鹽、硫酸鹽、氯

5、化物也分別作了研究。根據(jù)本品的性質(zhì)研究了高效液相色譜法測定他克莫司含量的方法，對分析方法的效能指標進行了實驗驗證，包括線性與范圍、回收率、精密度、溶液穩(wěn)定性等，結果證明含量測定方法可行。三批樣品含量測定結果均大于98.5％。 上述他克莫司的質(zhì)量研究，為控制產(chǎn)品質(zhì)量和制訂質(zhì)量標準，提供了實驗數(shù)據(jù)。 2、他克莫司質(zhì)量標準制訂及其起草說明在全面的質(zhì)量研究基礎上，結合實際情況，制定了科學合理、操作方便的質(zhì)量標準，包括性狀、鑒別、

6、檢查、含量測定等項目，主要有物理常數(shù)熔點和比旋度的測定，用光譜(紅外光譜)、色譜(高效液相色譜)鑒別他克莫司，用高效液相色譜法測定含量和有關物質(zhì)，用氣相色譜頂空進樣法檢查乙醇、丙酮的殘留量、還有熾灼殘渣、重金屬、砷鹽及水分檢查等。 質(zhì)量標準的起草說明，對質(zhì)量標準制訂的項目及其指標的必要性、合理性和可行性作了進一步說明。 3、他克莫司穩(wěn)定性考察在科學的質(zhì)量標準基礎上，按照藥典附錄的要求，進行了他克莫司穩(wěn)定性考察，包括影響因