HDAC抑制因子VPA在促進(jìn)白血病細(xì)胞分化、凋亡和增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷敏感性中的作用研究.pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)以人急性早幼粒細(xì)胞白血病HL-60細(xì)胞株為研究對(duì)象,重點(diǎn)觀察丙戊酸鈉(VPA)對(duì)NK細(xì)胞殺傷白血病細(xì)胞敏感性的影響,及其增加NK細(xì)胞殺傷敏感性的分子機(jī)制。同時(shí)探討HDAC抑制因子VPA在促進(jìn)全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化或促進(jìn)冬凌草甲素(ORI)誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡中的作用。擬為臨床聯(lián)合應(yīng)用VPA、小劑量ATRA或冬凌草甲素,減少藥物用量開(kāi)辟新型生物治療模式。
　　 方法：
　　 取

2、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL-60細(xì)胞,分別加入不同濃度的ATRA或/和VPA,于37℃、5％CO2飽和濕度下培養(yǎng)1至3天,臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖變化,FACS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞周期、凋亡變化,以及細(xì)胞表面CD11b表達(dá)變化;CFSE/PI雙染法FACS檢測(cè)NK-92細(xì)胞殺傷HL-60細(xì)胞活性,再通過(guò)FACS或RT-PCR檢測(cè)HL-60細(xì)胞表面NK細(xì)胞各類(lèi)受體配體的蛋白及基因表達(dá)情況;取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL-60細(xì)胞,分別加入不同濃度的ORI或/和VPA

3、,于37℃、5％CO2飽和濕度下培養(yǎng)1至3天,采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定ORI和VPA單獨(dú)和聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制,并用Annexin V/PI雙標(biāo)法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果：
　　 單獨(dú)應(yīng)用ATRA或VPA能夠明顯抑制HL-60細(xì)胞生長(zhǎng),阻滯細(xì)胞子G0/G1期,誘導(dǎo)細(xì)胞分化,VPA可以促進(jìn)ATRA的誘導(dǎo)分化作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)1mmol/L VPA聯(lián)合0.5μmol/L ATRA可增強(qiáng)HL-60細(xì)胞對(duì)NK細(xì)胞的

4、自然殺傷敏感性,并與上調(diào)HL-60細(xì)胞表面MHC-Ⅰ類(lèi)相關(guān)分子(MICA/B,ULBP)和CD54的表達(dá)及下調(diào)HLA-ABC有關(guān);在VPA促進(jìn)凋亡誘導(dǎo)方面,VPA可以協(xié)同ORI抑制HL-60細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,兩者具有明顯的協(xié)同誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡作用(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 VPA可以明顯的促進(jìn)ATRA誘導(dǎo)白血病HL-60細(xì)胞的分化作用,以及促進(jìn)ORI對(duì)白血病細(xì)胞的凋亡作用。VPA聯(lián)合ATRA可以增強(qiáng)H

5、L-60細(xì)胞對(duì)NK細(xì)胞自然殺傷敏感性,這種效應(yīng)可能是通過(guò)兩種藥物作用HL-60細(xì)胞后,升高NK細(xì)胞活化性受體配體的表達(dá),降低NK細(xì)胞抑制性受體配體的表達(dá),以及增加與NK粘附而實(shí)現(xiàn)的。本研究為臨床聯(lián)合應(yīng)用VPA和小劑量ATRA以增加療效、降低不良反應(yīng)提供了實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ),同時(shí)可長(zhǎng)期用于白血病的預(yù)防,控制殘留病灶,提高白血病細(xì)胞對(duì)宿主免疫監(jiān)視的敏感性,并為開(kāi)發(fā)類(lèi)似VPA的HDACi類(lèi)藥物,治療惡性腫瘤提供了新的思路。并且ORI和VPA具有協(xié)