三體綜合征產前診斷

1、案例一 ——遺傳病的產前診斷,產前診斷是在遺傳咨詢的基礎上，主要通過遺傳學檢測和影像學檢查，對高風險胎兒進行明確診斷，通過對患胎的選擇性流產達到胎兒選擇的目的，從而降低出生缺陷率，提高優(yōu)生質量和人口素質。產前診斷又稱宮內診斷。它是為了了解胎兒在子宮內的健康情況，有無先天性畸形或遺傳病，用某些特殊檢查方法在子宮內對胎兒進行診斷，以便及早采取措施避免殘疾兒的出生，提高出生人口的素質，

2、是有生學的重要組成部分。,產前診斷對象,35歲以上的高齡孕婦；夫婦雙方有一人為染色體畸變，或曾生育過染色體異?；純旱脑袐D；曾生育過單基因遺傳病患兒的孕婦、已知或推測為AR或XR遺傳病攜帶者的孕婦夫婦；夫婦之一有開放性神經管畸形，或出生過這種畸形患兒的孕婦；有原因不明的自然流產史、畸胎史、死胎及新生兒死亡史的孕婦；具有遺傳病家族史又系近親婚配的孕婦；夫婦之一有致畸因素接觸史的孕婦；羊水過多、宮內生長發(fā)育遲緩或疑為嚴重宮內感染

3、的孕婦,產前診斷方法,1.X線檢查 2.超聲波檢查 3.胎兒鏡 4.羊膜穿刺術 5.絨毛吸取術6.臍帶穿刺術 7.孕婦外周血分離胎兒細胞 8.植入前診斷,一、實驗目的,掌握遺傳病的產前診斷過程，通過對21三體綜合征的診斷設計，培養(yǎng)運用遺傳學現(xiàn)代技術解決醫(yī)學實際問題的能力。,二、實驗原理,1. 羊水中有一定數(shù)量胎兒脫落細胞，通過羊膜穿刺獲取羊水中的胎兒細胞，經體外培養(yǎng)后通過G顯帶實驗進行核型分析，判斷染色體是否畸形，診

4、斷是否患有21三體綜合征。,,2. G顯帶是指以Giemsa染料染色后，使染色體顯帶的技術。Giemsa染料是由噻嗪和曙紅組成的，著色時DNA先于2個噻嗪分子結合，然后再與一個曙紅分子結合，形成沉淀物，而DNA的某些部位對染料不敏感，由此形成明暗相間的條帶。,三、實驗材料、試劑及器材,（1）器材：離心管，離心機，天平，37℃溫箱，載玻片，蓋玻片，恒溫水浴鍋，光學顯微鏡，標本板，玻璃鉛筆，定時鐘，染色缸，直柄虹膜鑷，滴管。（2）

5、藥品：pH6.8 PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化鈉100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。,四、實驗步驟,取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,取材,1、腹部備皮，排光膀胱，平臥位常規(guī)消毒后鋪無菌洞巾。 2、麻醉，一般不必需要，精神緊張者或可用普魯卡因或利多卡因麻醉。,取材,3、選擇穿刺部位，經B超胎盤定位后避開胎盤?！　?中期妊娠時，一

6、般選擇在恥骨聯(lián)合上3橫指相當于子宮下段處，于腹中線或其左右側旁，捫及囊樣感的部位做穿刺；也可于宮底與恥骨聯(lián)合連線中點或左右任何一側穿刺。　　 晚期妊娠時，先捫清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎兒頸背部空隙處或胎兒肢體側空隙處穿刺。,取材,4、確定穿刺部位后，以20～21號腰椎穿刺針垂直刺入腹壁，通過腹壁及宮壁兩次阻力，當有落空感時即進入羊膜腔，抽出芯針，見羊水溢出，接上注射器，順利抽得清亮羊水

7、，再次證實在羊膜腔內后，可注射藥物。如欲做羊水檢查，則抽取羊水20ml立即送檢?！　?5、穿刺完畢后拔出穿刺針，局部壓迫5分鐘，穿刺部位敷以無菌紗布，膠布固定。,四、實驗步驟,取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,細胞體外培養(yǎng),,四、實驗步驟,取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,制片,,四、實驗步驟,取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,顯帶,1、將制

8、好的染色體標本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。 2、放入預溫至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用時間并不完全相同，可先試一張片子，再根據(jù)顯帶效果調整胰酶作用時間。,顯帶,3、在Giemsa 染液中染色10min，自來水沖洗干凈，晾干后，即可閱片。 4、鏡檢：在顯微鏡高倍目鏡下檢查顯帶標本，在染色體上若出現(xiàn)清晰的深淺相間的帶型，即為可取標本，可

9、供攝像分析,四、實驗步驟,取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,核型分析,純 合 型,核型分析,易 位

10、 型,核型分析,,五、注意事項,（1）胰蛋白酶濃度和處理時間隨氣溫高低有所不同。一般規(guī)律是標本存放時間越長，在胰蛋白酶當中處理時間越長。太新鮮的標本，染色體會出現(xiàn)毛茸現(xiàn)象。片齡很長的標本往往會導致斑點狀的染色體。（2）胰蛋白酶溫度：溫度越高，反應的速度就越快，一般是室溫，但溫度必須穩(wěn)定至少20min。（3）胰蛋白酶處理的時間：如果細胞呈紫藍色，說明胰蛋白酶的作用時間不夠，如果細胞呈桃

11、紅色，說明作用時間剛好。,結果判斷,(1)標準型 占患者總數(shù)的92.5%，患兒體細胞染色體有47條，有一條額外的21號染色體，核型為47，XX（或XY）+21。其發(fā)生機制為親代（多為母親）的生殖細胞在減數(shù)分裂時染色體不分離所致。,結果判斷,(2)嵌合型 僅占21-三體綜合征的2.5%-5%，是指受精卵在有絲分裂期間染色體不分離而導致的，因此只是部分而不是所有的細胞存在缺陷。患兒體內含有正常和21-三體細胞二

12、種細胞株，形成嵌合體，核型為46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21，其臨床表現(xiàn)隨正常細胞所占百分比而定。嵌合型的患兒的智商較其它兩型高，臨床并發(fā)癥的發(fā)生率也相對較少。,結果判斷,(3)易位型 約占全部病例的2.5%～5%，多為羅伯遜易位，即著絲粒融合，其額外的21號染色體長臂易位到另一近端著絲粒染色體上。最常見為D/G易位，D組中以14號染色體為主，核型為46，XX（或XY）-14，+ t（14q;21q），少