重組hIl-24聯(lián)合順鉑對(duì)子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞株生長(zhǎng)的影響.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:用重組人白細(xì)胞介素-24(rhIL-24)聯(lián)合順鉑(DDP)抑制子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞株的研究,探索體外用藥的有效劑量,進(jìn)行抗腫瘤機(jī)制的研究,為臨床應(yīng)用rhIL-24聯(lián)合順鉑治療子宮內(nèi)膜癌提供理論指導(dǎo)。
   方法:
   (1)將100μl濃度為2×104個(gè)細(xì)胞/ml的HEC-1B細(xì)胞和2x104個(gè)細(xì)胞/ml的WI-38細(xì)胞分別加入96孔板,在37℃、5%CO2及飽和濕度條件下的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞完全貼

2、壁生長(zhǎng)后,分別加入濃度為80ng/ml、100ng/ml、120ng/ml、150ng/ml、200ng/ml的rhIL-24和濃度為5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml的DDP,在同樣條件下繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h、72h,以CCK-8法分別檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。
   (2)將100μl濃度為2x104個(gè)細(xì)胞/ml的HEC-1B細(xì)胞和2×104個(gè)細(xì)胞/ml的wI-38細(xì)胞分別加入96孔板,

3、在37℃、5%CO2及飽和濕度條件下的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞完全貼壁生長(zhǎng)后,加入120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP,分別在24h、48h、72h,以CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)聯(lián)合作用抑制率。
   (3)將100μl濃度為2x104個(gè)細(xì)胞/ml的HEC-1B細(xì)胞和2x104個(gè)細(xì)胞/ml的WI-38細(xì)胞分別加入50ml培養(yǎng)瓶中,在37℃、5%CO2及飽和濕度條件下的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞完全貼壁生長(zhǎng)后,分

4、別加入120ng/ml的rhIL-24,10μg/ml的DDP,120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP,培養(yǎng)24h,以流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
   (4)將100μl濃度為2×104個(gè)細(xì)胞/ml的HEC-1B細(xì)胞和2×104個(gè)細(xì)胞/ml的WI-38細(xì)胞分別加入50ml培養(yǎng)瓶中,在37℃、5%CO2及飽和濕度條件下的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞完全貼壁生長(zhǎng)后,分別加入120ng/ml的rhIL-24,10μg/

5、ml的DDP,120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP,培養(yǎng)培養(yǎng)24h、48h,在熒光顯微鏡下分別觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化。
   結(jié)果:
   (1)120ng/ml的rhIL-24對(duì)HEC-1B細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率分別是18.0%,rhIL-24的濃度過(guò)低和濃度過(guò)高,其抑制率均低于此濃度;rhIL-24對(duì)WI-38細(xì)胞無(wú)明顯抑制作用;DDP的抑制率與DDP的不同濃度呈劑量依賴(lài)關(guān)系。
   (2)1

6、20ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP,在24h,48h,72h對(duì)HEC-1B細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率分別是59.0%,88.2%,91.9%;對(duì)WI-38細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率分別是63.1%,88.7%,92.4%。
   (3)120ng/ml的rhIL-24,10μg/ml的DDP,F(xiàn)CM檢測(cè)在24h時(shí),HEC-1B細(xì)胞的凋亡率分別是:14.5%,26.8%;WI-38細(xì)胞凋亡率分別是:6.8%,17.1%。

7、   (4)120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP,F(xiàn)CM檢測(cè)在24h時(shí),HEC-1B細(xì)胞的凋亡率是:29.6%;WI-38細(xì)胞的凋亡率是:20.1%。
   (5)120ng/ml的rhIL-24,10μg/ml的DDP,120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP,熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)變化,可見(jiàn):正常細(xì)胞不著色;凋亡細(xì)胞染草綠色,可見(jiàn)細(xì)胞核呈不規(guī)律破壞或固縮呈圓珠狀;非凋亡細(xì)胞的死

8、亡細(xì)胞呈整體細(xì)胞染色。
   結(jié)論:
   (1)不同濃度的rhIL-24對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞有抑制作用,其抑制呈非劑量依賴(lài)關(guān)系,其抑制適宜濃度為120ng/ml;不同濃度的DDP對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞有抑制作用,其抑制呈劑量依賴(lài)關(guān)系,DDP對(duì)正常細(xì)胞亦有抑制作用。
   (2)rhIL-24、DDP及兩者聯(lián)合對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞有抑制作用,聯(lián)合抑制率高于單獨(dú)用藥,聯(lián)合用藥具有協(xié)同作用。
   (3)rhIL-24、D

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