抗人肝癌基因工程抗體單雙價(jià)嵌合Fab的構(gòu)建和在大腸桿菌及畢赤酵母中的表達(dá).pdf

1、 本實(shí)驗(yàn)旨在研究提高產(chǎn)量并獲得高結(jié)合活性的抗人肝癌嵌合Fab抗體，我們利用大腸桿菌和巴氏酵母高效表達(dá)抗人肝癌嵌合Fab和F(ab’)2兩種形式的抗體形式，并分析其與相應(yīng)抗原的結(jié)合活性，進(jìn)而明確基因工程抗體大規(guī)模培養(yǎng)的可行性。產(chǎn)物經(jīng)過(guò)鑒定和純化，得到高表達(dá)的抗人肝癌嵌合Fab并為其下一步應(yīng)用研究打下基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建抗人肝癌基因工程雙價(jià)嵌合Fab抗體兩種形式的載體并進(jìn)行了原核非融合包涵體表達(dá)，復(fù)性的Linker32連接的cF(

2、ab’)2抗體，具有特異性抗原結(jié)合活性。成功構(gòu)建了PYZ/cFab抗體載體，并成功的獲得cFab抗體的表達(dá)，經(jīng)protein G親合層析柱純化表達(dá)產(chǎn)物后，濃度達(dá)到4mg/L，與HAb18GE有很好的結(jié)合活性，免疫熒光顯示其與人肝癌細(xì)胞系良好的結(jié)合能力。成功構(gòu)建了PYZ/cF(ab’)2雙價(jià)抗體載體并獲得高效表達(dá)。與親本鼠抗體相比，表達(dá)產(chǎn)物保持了良好的特異性和親合力，同時(shí)與單價(jià)cFab相比更好的特異性和親合力。成功地構(gòu)建了酵母重組質(zhì)粒pP