金釵石斛總堿對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎系膜細(xì)胞增殖及PPAR-γ表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察金釵石斛總堿對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖及基質(zhì)積聚和過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPAR-γ)的表達(dá)影響影響及其機(jī)制。
　　 方法:1、金釵石斛干品經(jīng)酸性乙醇提取后通過強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂富集，鑒定方法選用氣質(zhì)聯(lián)用分析，總堿含量采用酸性染料比色法測(cè)定。2、將大鼠腎系膜細(xì)胞分為正常對(duì)照組(NC)、高糖對(duì)照組(HG)、溶媒對(duì)照組(MC)、羅格列酮對(duì)照組(ROZ)、金釵石斛總堿低(LD)、中(MD)、高(HD)劑量組

2、，各組細(xì)胞3份重復(fù)，分別藥物作用24h后通過CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。3、qPCR法檢測(cè)TGF-β1、FN及PPAR-γ mRNA的表達(dá)情況。4、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法、酶聯(lián)免疫法、免疫印跡法分別檢測(cè)FN、TGF-β1、PPAR-γ的蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:①金釵石斛提取物總堿為黃褐色晶體顆粒，不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，經(jīng)氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)分析，確定為金釵石斛堿成分，酸性染料比色法測(cè)定總堿含量約為69％;②CCK

3、-8法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，金釵石斛總堿各組細(xì)胞增殖率均低于高糖模型組(P＜0.05);③相較于高糖模型組，金釵石斛總堿各劑量組TGF-β1、FN mRNA表達(dá)量降低(P＜0.05);④相較于高糖模型組，金釵石斛總堿各劑量PPAR-γ mRNA表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);⑤Western blot檢測(cè)PPAR-γ蛋白表達(dá)，金釵石斛總堿中、低劑量組表達(dá)量相較于高糖模型組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，金釵石斛總堿高劑量組降低(P＜0.05)。