金釵石斛多糖對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激及Nrf2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀(guān)察金釵石斛多糖對(duì)高糖作用下大鼠腎小球系膜細(xì)胞(HBZY-1)氧化應(yīng)激及Nrf2蛋白表達(dá)的影響，并初步探討其可能參與的作用機(jī)制。
　　 方法：1.采用水提醇沉法進(jìn)行多糖的提取并經(jīng)過(guò)DEAE-FF對(duì)提取粗多糖進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化；鑒定方法包括紅外光譜分析該多糖的特征性吸收峰；紫外分光光度法對(duì)多糖純度進(jìn)行判定；苯酚-硫酸法進(jìn)行多糖含量測(cè)定。2.將HBZY-1細(xì)胞分為正常對(duì)照組(NC)、高糖作用組(HG)、NAC作用組(NA)、

2、金釵石斛多糖低(LD)、中(MD)、高(HD)劑量組，藥物作用時(shí)間24h，ABTS法檢測(cè)各組細(xì)胞的總抗氧能力；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧的變化；WST-1法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況。3.熒光定量PCR檢測(cè)Nrf2mRNA、NQO1mRNA的表達(dá)。免疫熒光觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)Nrf2表達(dá)與核轉(zhuǎn)位的情況。免疫印跡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Nrf2蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：1.經(jīng)水提醇沉及陰離子交換柱純化得到金釵石斛多糖組分FDP1，測(cè)得金釵石斛多糖相對(duì)含量為

3、98.1％。2.與正常對(duì)照組相比，高糖模型組細(xì)胞的總抗氧能力下降，而ROS表達(dá)明顯增加(P<0.05)。金釵石斛多糖FDP1作用組與高糖組相比，均可以一定程度的遏止細(xì)胞內(nèi)抗氧化能力的衰減與ROS生成水平的增加。另外高糖組較正常對(duì)照組細(xì)胞的增殖速度加快(P<0.05)，而金釵石斛多糖各劑量組均對(duì)于高糖誘導(dǎo)的增殖沒(méi)有影響。3.與高糖模型組相比，金釵石斛多糖低中高劑量組均能明顯上調(diào)Nrf2mRNA、Nrf2蛋白的表達(dá)(P<0.05)，并促進(jìn)細(xì)