RACK1對(duì)肺腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及臨床意義.pdf

1、目的:RACK1(receptor for activated C kinase1)作為激活的蛋白激酶C受體，可與PKC(protein kinase C)結(jié)合調(diào)控多種細(xì)胞功能如細(xì)胞擴(kuò)散，細(xì)胞骨架組裝、細(xì)胞粘附和細(xì)胞遷移等，近年來研究顯示其與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究觀察沉默RACK1后，肺腺癌細(xì)胞A549侵襲轉(zhuǎn)移能力變化;初步探討RACK1對(duì)肺腺癌侵襲轉(zhuǎn)移作用的機(jī)制;并檢測(cè)分析肺腺癌組織RACK1表達(dá)與肺腺癌臨床病理特征及預(yù)后之間的

2、關(guān)系。
　　 方法:構(gòu)建質(zhì)粒后轉(zhuǎn)染肺腺癌A549細(xì)胞，通過real-time PCR，RT-PCR,以及Western-blot，篩選高效并穩(wěn)定敲低RACK1的肺腺癌A549細(xì)胞株;應(yīng)用Transwell試驗(yàn)，劃痕愈合試驗(yàn)以及細(xì)胞骨架免疫熒光檢測(cè)穩(wěn)定敲低RACK1的肺腺癌A549細(xì)胞株的侵襲和轉(zhuǎn)移能力及細(xì)胞形態(tài)的變化;通過Western-blot法檢測(cè)A549vector和A549RACK1-shRNA1兩組細(xì)胞中與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)

3、的蛋白Snail、E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin以及MMP-9的蛋白表達(dá)情況;應(yīng)用免疫組化研究RACK1在92例肺腺癌組織中的表達(dá)情況，依據(jù)Shimizu評(píng)分法將其分為RACK1高表達(dá)組與RACK1低表達(dá)組，應(yīng)用Kaplan-Meier生存分析并采用Log-rank檢驗(yàn)兩組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，應(yīng)用Spearman相關(guān)性分析和建立Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析RACK1表達(dá)水平與肺腺癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

4、>　　 結(jié)果:
　　 1.篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染shRNA1質(zhì)粒并高效敲低RACK1的肺腺癌A549細(xì)胞株;
　　 2.Transwell侵襲和遷移試驗(yàn)以及劃痕愈合試驗(yàn)均表明A549RACK1-shRNA1（實(shí)驗(yàn)組）細(xì)胞較A549vector組（對(duì)照組）細(xì)胞的侵襲和遷移能力明顯減弱;
　　 3.觀察細(xì)胞免疫熒光可見實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)皺縮，細(xì)胞骨架紊亂;
　　 4.敲低RACK1后肺腺癌細(xì)胞中蛋白表達(dá)水平改變，其中實(shí)

5、驗(yàn)組細(xì)胞中Snail、N-Cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著下調(diào);實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中E-Cadherin蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著上調(diào);
　　 5.臨床研究的結(jié)果顯示，在無瘤生存分析和總體生存分析中，RACK1高表達(dá)組中位生存時(shí)間均顯著短于低表達(dá)組;相關(guān)性分析中RACK1高表達(dá)與肺腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān);而單因素和多因素分析中，RACK1高表達(dá)是肺腺癌不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。
　　 結(jié)論: