糞樣孕酮酶免疫檢測方法的建立及在母豬早期妊娠診斷的應用.pdf

1、孕酮主要是由卵巢黃體細胞、卵泡內(nèi)膜細胞和妊娠時的胎盤產(chǎn)生的，屬于甾體類激素，存在于動物的血液、糞便、尿液、乳汁和唾液中。通過測定這些樣品中孕酮濃度可以進行早期妊娠診斷和卵巢機能的狀態(tài)的監(jiān)測。
　　本實驗根據(jù)酶免疫的基本原理建立了母豬糞樣孕酮ELISA檢測方法，在此基礎上優(yōu)化了該檢測方法的反應條件:酶標板的孔間變異系數(shù)為3.81％;最佳抗體包被濃度的稀釋度為1∶20000;酶標抗原的最佳工作濃度的稀釋度為1∶20000;最佳包被時間

2、4℃過夜、37℃2h;2％BSA的封閉效果最好;建立的標準曲線為Y=-10.71 X+62.751(r2=-0.9947);底物體系中OPD的最佳反應濃度為0.4mg/mL;過氧化氫的最佳用量為1.6μL/mL(30％H2O2);底物顯色時間為37℃0.5h。
　　依據(jù)劑量-反應曲線參數(shù)的統(tǒng)計方法使用A/A0-logC的數(shù)學模型，測得了ELSIA的相關參數(shù)。曲線擬合的方程為Y=-10.71 X+62.751(r2=-0.9947)

3、;方法的靈敏度為12.13ng/g;方法的批內(nèi)變異系數(shù)為4％;方法的批間變異系數(shù)為9.6％;與雌二醇、雌三醇和雌酮無交叉反應(P＜0.01％)，與睪酮的交叉反應為0.35％;方法的回收率在91％-109.7％之間。
　　根據(jù)母豬糞樣孕酮ELISA檢測方法，通過檢測配種后母豬糞樣孕酮濃度進行早期妊娠診斷。當配種后母豬糞樣孕酮的濃度超過150 ng/g糞樣時，就可確認其妊娠;小于150 ng/g糞樣時，可確認其空懷。本試驗檢測了配種后