產(chǎn)氨短桿菌發(fā)酵及固定化產(chǎn)氨短桿菌合成輔酶A工藝研究.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)氨短桿菌發(fā)酵及固定化產(chǎn)氨短桿菌合成輔酶A工藝研究姓名：欒貽宏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物與生化藥學(xué)指導(dǎo)教師：郭學(xué)平王鳳山20081028山東大學(xué)碩士學(xué)位論文K2HP04l％，尿素07％。用此培養(yǎng)基配比搖瓶發(fā)酵，CoA產(chǎn)量達(dá)360U／mL，比使用基礎(chǔ)西已方的CoA產(chǎn)量(273U／mL)提高30％以上。(7)蘺體分兩次加入優(yōu)于一次性加入。第一次加入前體總量的3／4，6h盾第二次加入前體總量的1／4，CoA產(chǎn)量達(dá)420

2、U／mL，比一次性加入前體的CoA產(chǎn)量(372U／mL)提高約12％。(8)10L發(fā)酵罐放大實(shí)驗(yàn)結(jié)果較理想，CoA產(chǎn)量達(dá)到527U／mL，比搖瓶實(shí)驗(yàn)工藝CoA產(chǎn)量(4201U觸L)提高了約25％。2固定化產(chǎn)氨短桿菌的制備及其合成CoA的初步研究(1)通過對(duì)不同載體制備的固定化細(xì)胞的凝膠性能及CoA合成能力的綜合考察，篩選出的制備固定化產(chǎn)氨短桿菌細(xì)胞合適載體為卡拉膠魔芋膠刺槐豆膠。(2)通過凝膠配方的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定復(fù)合凝膠的最佳配方為：卡

3、拉膠10％，魔芋膠04％，刺槐豆膠04％。(3)通過培養(yǎng)液配方的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定合成CoA的前體培養(yǎng)液濃度為：ATP2％，泛酸鈣03o4，半胱氨酸03％。(4)固定化產(chǎn)氨短桿菌在中性或偏酸性培養(yǎng)液中合成CoA的能力較強(qiáng)，在偏堿性環(huán)境中合成CoA的量很少。(5)在前體培養(yǎng)液中添加適量的苯扎溴銨有利于CoA的合成，苯扎溴銨的最適濃度為005％。(6)固定化產(chǎn)氨短桿菌細(xì)胞經(jīng)過凝膠配方優(yōu)化和培養(yǎng)液配方優(yōu)化后，CoA最高產(chǎn)量可達(dá)360U／mL，在重

4、復(fù)使用8次后，CoA合成能力仍保存50％以上。3本課題研究的成果(1)通過對(duì)產(chǎn)氨短桿菌菌種的分離純化、種子培養(yǎng)質(zhì)量指標(biāo)控制、發(fā)酵培養(yǎng)基和前體物質(zhì)加入方式的研究，搖瓶發(fā)酵CoA的產(chǎn)量達(dá)到420U／mL，比原始菌種和基礎(chǔ)培養(yǎng)基搖瓶發(fā)酵CoA的產(chǎn)量181I7／mI，提高了130％。(2)10L發(fā)酵罐放大實(shí)驗(yàn)結(jié)果較理想，CoA產(chǎn)量達(dá)到527U／mL，比搖瓶實(shí)驗(yàn)工藝CoA產(chǎn)量(420U／mL)提高了約25％，比國內(nèi)發(fā)酵生產(chǎn)工藝CoA產(chǎn)量(平均25