HLA寡核苷酸分型芯片的制備及其初步應(yīng)用.pdf

1、目的:制備HLA寡核苷酸分型芯片，并應(yīng)用基因芯片篩查糖尿病腎病遺傳易感性?xún)?nèi)容HLA分型在骨髓干細(xì)胞庫(kù)的建立、疾病易感性機(jī)理研究、組織器官移植等方面具有重大應(yīng)用價(jià)值。由于 HLA 基因結(jié)構(gòu)的高度多態(tài)性，對(duì) HLA 抗原分型存在很大困難。目前對(duì)于HLA-Ⅰ、Ⅱ類(lèi)抗原的分型，臨床上常常采用血清學(xué)方法，但由于該方法存在著廣泛的交叉反應(yīng)和難以找到理想的單抗，常常出現(xiàn)技術(shù)上的困難和分型判斷誤差．PCR-SSP方法也有采用，國(guó)內(nèi)外的分型試劑盒大都采用

2、這種方法，但是因需要通過(guò)大量的電泳來(lái)確定分型結(jié)果，其臨床大量樣品應(yīng)用也受到了限制。自20世紀(jì)90年代開(kāi)始，基因芯片技術(shù)在高通量生物檢測(cè)領(lǐng)域得到迅速發(fā)展，日臻成熟。作為斑點(diǎn)雜交技術(shù)的延伸，基因芯片技術(shù)以其快速，高通量，大信息量檢測(cè)等特點(diǎn)，在HLA分型方面有很大優(yōu)勢(shì)，自基因水平對(duì)HLA-Ⅰ、Ⅱ工類(lèi)抗原分型無(wú)論在準(zhǔn)確性及方便性上都具有重要意義。設(shè)計(jì)了 213 種寡合苷酸探針，制備了基因芯片，建立了 HLA 寡核苷酸分型芯片這一檢測(cè)平臺(tái)，并應(yīng)用

3、該分型芯片進(jìn)行糖尿病。腎病的遺傳易感性研究。 方法:在本實(shí)驗(yàn)中用三甲氧基硅烷建立了優(yōu)化環(huán)氧片基的制備方法。并依據(jù)第十三屆國(guó)際組織相容性工作會(huì)議報(bào)告及相關(guān)文獻(xiàn)，同時(shí)考慮遺傳的連鎖不平衡，及強(qiáng)脊炎，幼年型糖尿病等與 HLA 密切相關(guān)的遺傳病等因素，選擇了中國(guó)北方漢族人群基因頻率較高的等位基因，根據(jù)HLA-A，HLA-B，HLA-DR，HLA-DQB，HLA-DQA不同基因亞型的獨(dú)特序列，完成了探針的設(shè)計(jì)與篩選，最后設(shè)計(jì)了213條探針

4、，可完成中分辨度分型。在這一平臺(tái)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行一些應(yīng)用基因芯片篩查糖尿病腎病遺傳易感性的相關(guān)研究工作。 結(jié)果:所有樣本的HLA-Ⅰ、Ⅱ類(lèi)抗原基因分型均獲成功。可分辨出598個(gè)Ⅰ類(lèi)抗原基因型，511個(gè)Ⅱ類(lèi)抗原基因型，可撿出Ⅰ類(lèi)抗原基因位點(diǎn)57個(gè)，Ⅱ類(lèi)抗原基因位點(diǎn)30個(gè)。并證實(shí)了B41、DR4等基因與糖尿病腎病的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論:這些探針完全可以完成中分辨率的組織配型，較臨床現(xiàn)在常用的進(jìn)口試劑盒有更方便，更省時(shí)，更精確而且可