X射線致HT-29、HeLa、GLC-82細(xì)胞損傷過(guò)程中NADPH氧化酶的作用.pdf

1、目的：探討①2Gy X射線輻照使低射線敏感細(xì)胞HT-29，中射線敏感細(xì)胞HeLa,高射線敏感細(xì)胞GLC-82活性的變化。②NADPH氧化酶在X射線誘導(dǎo)HT-29、HeLa、GLC-82細(xì)胞損傷過(guò)程中的作用。 方法：①選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期生長(zhǎng)良好的上述3種細(xì)胞株，將其分為對(duì)照組和2Gy X射線輻照組，MTT比色法檢測(cè)三種細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)的變化。②將上述3種細(xì)胞分為對(duì)照組、NADPH氧化酶抑制劑DPI處理組、12Gy X射線輻照組、NADPH

2、氧化酶抑制劑DPI處理聯(lián)合X射線輻照組四個(gè)組。用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的活性氧(Reactive oxygen species，ROS)變化；再將上述3種細(xì)胞分為對(duì)照組和12Gy X射線輻照組后，用免疫細(xì)胞化學(xué)和激光共聚焦顯微掃描術(shù)(Immunostaining and laser-scanning confocal microscopy)來(lái)研究NADPH氧化酶細(xì)胞膜亞基gp90phox胞質(zhì)亞基p47phox的“共定位”，用Weste

3、rn blotting來(lái)檢測(cè)NADPH氧化酶的關(guān)鍵亞基gp91phox輻照前后在細(xì)胞中表達(dá)量變化情況。 結(jié)果：①三種細(xì)胞經(jīng)X射線輻照后，細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)有明顯降低。②在經(jīng)12 Gy X射線輻照后細(xì)胞內(nèi)ROS明顯增加，在用NADPH氧化酶抑制劑處理后再輻照，則細(xì)胞內(nèi)ROS降低到未輻照水平；同時(shí)輻照后NADPH氧化酶細(xì)胞質(zhì)亞基’p47phox從細(xì)胞質(zhì)遷移到細(xì)胞膜上并和細(xì)胞膜亞基gp91phox結(jié)合； Western blotting檢測(cè)