乙型肝炎病毒HBsAg基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Chang-Liver肝細胞系差異表達蛋白的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染是嚴重影響我國人民健康的重要傳染病?？梢鸺毙浴⒙愿窝?、肝硬化，并與肝癌的發(fā)生有密切的關(guān)系。目前，對于具體的HBV致病(癌)機制尚不十分明確。其中，HBV DNA整合于肝細胞基因組被認為是肝細胞損傷、HCC發(fā)生的主要機制之一。 HBV是一種嗜肝部分雙鏈DNA病毒，其基因組長約3.2kb，具有4個主要的開放讀碼框架(ORF)，分別命名為S、C、P、X區(qū)，HBsAg是由S區(qū)編碼的表面蛋白，其編碼區(qū)長度為6

2、81個核苷酸(nt)，有226個氨基酸(aa)。HBV表面抗原蛋白具有多種生物功能，并在部分整合型肝細胞內(nèi)大量表達。 為了解HBsAg整合入肝細胞基因組后，肝細胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達譜變化，以進一步了解其對肝細胞生長代謝的影響，本研究成功構(gòu)建了HBsAg的真核表達載體并建立穩(wěn)定表達目的蛋白的Chang Liver-HBsAg-EGFP細胞系及空質(zhì)粒對照的Chang Liver-EGFP細胞系，經(jīng)雙向凝膠電泳。應(yīng)用ImageMaster2

3、DPaltinum5.1軟件(Amersham)對膠圖進行斑點檢測和匹配。選取差異蛋白質(zhì)點，用MALDI-TOF-MS質(zhì)譜進行分析，獲得肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF)。然后通過Mascot搜索查詢和生物信息學分析，鑒定出9個數(shù)據(jù)可靠的差異表達蛋白質(zhì)分子，與對照組相比，其中6個為上調(diào)蛋白(Proteindisulfide-isomerase precursor、HSP70 class molecular chaperones、 stratifi

4、n、peroxiredoxin1、Peroxiredoxin5、guanylate-binding protein)，3個為下調(diào)蛋白(Transgelin-2、capping protein(actin filament)muscle Z-line、Porin31HM)。包括：抗氧化蛋白、分子伴侶，參與物質(zhì)代謝蛋白，細胞信號傳導相關(guān)蛋白質(zhì)，細胞結(jié)構(gòu)蛋白等。由此提示我們：整合至細胞基因組的表面抗原基因及其表達蛋白對細胞的生長、代謝、正常生