反義miR-103上調(diào)TIMP-3影響子宮內(nèi)膜癌侵襲和增殖能力的體外研究.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率呈逐年增高趨勢，嚴重影響女性生命健康，因此探討子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機制有重要的意義。目前大量研究表明MiRNA在多種腫瘤中存在異常表達，且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等有密切的關(guān)系。MiRNA103在子宮內(nèi)膜癌中表達異常增高，本研究利用反義技術(shù)下調(diào)miR-103的表達后，結(jié)合生物信息學和分子生物學技術(shù)驗證其在子宮內(nèi)膜癌細胞株中的靶基因TIMP-3，并探討其通過調(diào)控靶基因在子宮內(nèi)膜癌細胞株中發(fā)揮的生物學功能，為理解miR-1

2、03在子宮內(nèi)膜癌形成過程中的作用提供依據(jù)。
　　 方法：體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa和HEC-1B細胞株，利用脂質(zhì)體介導Anti-miR-103轉(zhuǎn)染入細胞，以無義隨機序列作為對照，實時定量PCR技術(shù)檢測miR-103表達水平的變化；構(gòu)建熒光報告載體質(zhì)粒pGL3/TIMP-3-wt和pGL3/TIMP-3-mut，并將其與Anti-miR-103和海腎質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，檢測熒光素酶活性的變化；Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染A

3、nti-miR-103后Ishikawa和HEC-1B細胞株中TIMP-3蛋白質(zhì)表達的變化；MTT法檢測miR-103下調(diào)后對細胞增殖能力的影響；Annexin V-PE雙染后流式細胞儀檢測細胞的凋亡情況；Tranwell腫瘤侵襲實驗檢測細胞侵襲能力的變化。
　　 結(jié)果：實時定量PCR證實轉(zhuǎn)染Anti-miR-103后，Ishikawa和HEC-1B細胞株中miR-103的表達水平明顯下調(diào)；Anti-miR103和pGL3-TI

4、MP-3-wt共轉(zhuǎn)染組相對熒光活性值明顯高于無義隨機序列和pGL3-TIMP-3-wt共轉(zhuǎn)染組；Westem blot技術(shù)證實轉(zhuǎn)染Anti-miR-103后可明顯上調(diào)TIMP-3蛋白質(zhì)表達；MTT法證實轉(zhuǎn)染Anti-miR-103后可明顯抑制細胞的增殖能力；細胞凋亡檢測提示轉(zhuǎn)染Anti-miR-103組與陰性對照組相比細胞凋亡情況無明顯差別；Transwell腫瘤細胞侵襲實驗提示轉(zhuǎn)染Anti-miR-103后子宮內(nèi)膜癌細胞株的侵襲能力明