基于Caco-2細(xì)胞單層模型對芒果苷跨膜相關(guān)影響因素研究.pdf

1、目的：利用Caco-2細(xì)胞單層模型研究芒果苷跨膜轉(zhuǎn)運的影響因素，篩選促進(jìn)芒果苷吸收的方法和手段。
　　方法：(1)建立Caco-2細(xì)胞單層模型，通過跨膜電阻測定和熒光素鈉的通透率對單層模型的完整性與通透性進(jìn)行評價。(2)考察芒果苷、芒果苷苷元、高芒果苷、槲皮素、沒食子酸等藥物及羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)對Caco-2細(xì)胞的急性毒性反應(yīng)。(3)建立高效液相色譜法測定樣本中芒果苷的

2、方法，測定樣品中芒果苷的濃度。(4)通過Caco-2細(xì)胞單層模型考察芒果敢的轉(zhuǎn)運。(5)通過Caco-2細(xì)胞單層模型考察芒果葉部分成分芒果苷苷元、高芒果苷、槲皮素、沒食子酸對芒果苷跨膜的影響。(6)通過Caco-2細(xì)胞單層模型考察常用制劑輔料羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)對芒果苷跨膜轉(zhuǎn)運的影響。
　　結(jié)果：(1) Caco-2細(xì)胞單層模型的跨膜電阻大于250Ω·cm-2,熒光素鈉的

3、累積通透率小于4.8μg·h-1·cm-2。(2)在實驗濃度范圍內(nèi)，芒果苷、高芒果苷、芒果苷苷元、槲皮素、沒食子酸及羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮等對Caco-2細(xì)胞無急性毒性實驗。(3)實驗樣品中芒果苷濃度的測定方法為：流動相為甲醇-0.1％冰醋酸(35:65)；流速1ml·min-1；柱溫35℃；檢測波長258nm。(4)芒果苷在各個實驗濃度：50μg·ml-1、100μg·ml-1、310μg·ml-1、600μg·

4、ml-1下的表觀滲透系數(shù) Papp(×10-8 cm·sec-1)分別為：AP→BL,1.414±0.915、2.271±1.351、2.632±1.576、3.571±1.440，BL→AP,2.632±2.35、3.501±2.433、4.765±3.761、7.178±5.796，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析各濃度的吸收外排均無顯著性差異。(5)芒果苷苷元、高芒果苷、槲皮素、沒食子酸分別在高、中、低濃度下，芒果苷的轉(zhuǎn)運表觀滲透系數(shù)Papp(×10

5、-8cm·sec-1)均具有明顯變化，具體結(jié)果如下，芒果苷苷元：AP→BL，350.877±15.897、526.316±33.601、157.895±11.930；BL→AP，175.439±14.763、350.877±15.727、100.263±17.890，統(tǒng)計學(xué)分析，與對照組具有顯著性差異；高芒果苷：AP→BL，35.088±7.151、52.632±16.996、5.263±3.273，BL→AP，70.175±8.398

6、、35.088±6.685、17.544±4.533，統(tǒng)計學(xué)分析，與對照組具有顯著性差異；槲皮素：AP→BL，104.35±15.775、42.63±7.457、52.63±8.935，BL→AP，70.170±10.397、32.630±15.621、25.090±7.991，統(tǒng)計學(xué)分析，與對照組比較具有顯著性差異；沒食子酸：AP→BL，52.632±9.887、17.540±3.479、13.045±1.012；BL→AP，17.5

7、34±5.671、7.363±3.714、8.772±3.340，統(tǒng)計學(xué)分析，在高濃度沒食子酸存在下，芒果苷的表觀滲透系數(shù)與對照組比較具有顯著性差異。(6)常用輔料羥丙基-β-環(huán)糊精，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000，聚乙烯吡咯烷酮對芒果苷的轉(zhuǎn)運也存在一定影響。其中以羥丙基-β-環(huán)糊精較為顯著，羥丙基-β-環(huán)糊精對芒果苷轉(zhuǎn)運表觀滲透系數(shù)Papp(×10-8cm·sec-1)影響結(jié)果如下：AP→BL，10.297±2.397、5.138

8、±4.557、2.822±1.478，BL→AP，1.823±1.345、3.339±2.897、4.69±3.478，統(tǒng)計學(xué)分析，在高濃度下，羥丙基-β-環(huán)糊精對芒果苷吸收的表觀滲透吸收存在顯著差異。
　　結(jié)論：芒果苷在過飽和濃度、飽和濃度及非飽和濃度下，表觀滲透系數(shù)Papp<1×10-6,為吸收不良藥物，吸收率小于20%，各濃度下吸收量及吸收速率沒有明顯差異，推測其轉(zhuǎn)運存在載體的參與，且具有飽和顯著，經(jīng)計算其表觀滲透率PDR均

9、小于1.5,推測芒果苷的跨膜轉(zhuǎn)運以外排為主；芒果苷苷元、高芒果苷、槲皮素、沒食子酸在高、中、低濃度條件下，對芒果苷的轉(zhuǎn)運存在一定影響，芒果苷轉(zhuǎn)運表觀滲透系數(shù)均有顯著提高，且PDR<1.5,表明各個化合物能夠改變芒果苷的轉(zhuǎn)運方向，促進(jìn)芒果苷的吸收；藥用輔料羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯吡咯烷酮能夠增加芒果苷的溶解度的同時，對芒果苷的轉(zhuǎn)運也存在一定的影響，羥丙基-β-環(huán)糊精，聚乙二醇4000對芒果苷的轉(zhuǎn)運存在