APOE---小鼠TLR9介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化效應(yīng)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究.pdf

1、背景及目的：
　　動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）作為心血管疾病最常見(jiàn)的病理改變，目前認(rèn)為其發(fā)生發(fā)展與免疫應(yīng)答及伴隨其發(fā)生的慢性炎癥反應(yīng)有關(guān)。Toll樣受體（toll like receptors,TLRs）在天然免疫反應(yīng)和獲得性免疫反應(yīng)中均具有重要作用，目前關(guān)于TLR9在AS發(fā)病機(jī)制中的作用還尚未明確。因此，本研究的目的是探討TLR9是否可通過(guò)影響巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)而影響AS的形成。
　　方法：

2、　　通過(guò) TLR9的拮抗劑（IRS869）和激動(dòng)劑（ODN1826）刺激小鼠 RAW264.7細(xì)胞，分為四組：對(duì)照組、ODN組、IRS組和ODN+ IRS組。ApoE?/?小鼠分為兩組，對(duì)照組（生理鹽水組，saline，n=10）和干預(yù)組（IRS869組,n=10），分別給予腹腔注射生理鹽水（與干預(yù)組等體積）和IRS869（40μg），每周兩次，連續(xù)注射12周后處死小鼠。用Western blotting檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞各組TL

3、R9的蛋白含量，及主動(dòng)脈TLR9及其下游的分子MyD88，p-NF-κB和IRF7的蛋白含量；用流式細(xì)胞術(shù)和免疫化學(xué)熒光檢測(cè) RAW264.7細(xì)胞各組 M1型和M2型的比例；用RT-PCR和ELISA法檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞各組TNF-α的表達(dá)；用RT-PCR和免疫熒光檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞和動(dòng)脈斑塊的M1型和M2型巨噬細(xì)胞的相關(guān)標(biāo)志性因子和炎癥因子；主動(dòng)脈根部切片做油紅 O染色檢測(cè)斑塊面積；取無(wú)名動(dòng)脈進(jìn)行免疫組化分析、天狼猩紅染色

4、和油紅O染色用于評(píng)價(jià)動(dòng)脈斑塊的易損性。
　　結(jié)果：
　　1. RAW264.7細(xì)胞 IRS組與對(duì)照組比 TLR9蛋白表達(dá)量明顯下降（p<0.05），ODN+IRS組與ODN組比TLR9蛋白表達(dá)量相對(duì)下降（p<0.05）。
　　2. ApoE?/?小鼠抑制 TLR9后動(dòng)脈斑塊的TLR9、MyD88、 p-NF-κB和IRF7蛋白表達(dá)量分別下降73％、66%、64%和58%，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　

5、　3. RAW264.7細(xì)胞中，與對(duì)照組比，ODN組M1型巨噬細(xì)胞比例相對(duì)增加，IRS組M2型比例相對(duì)增加；與ODN組比，ODN+IRS同時(shí)刺激時(shí)引起M2/M1型比值的相對(duì)增加。
　　4.與對(duì)照組比，抑制TLR9后動(dòng)脈斑塊的CD206/iNOS比值相對(duì)增加〔p〈0.05〕，及斑塊M1型巨噬細(xì)胞相關(guān)炎癥因子（IL-1β，iNOS，Ciita）表達(dá)相對(duì)降低（P<0.05）和M2型相關(guān)炎癥因子（Ym1，F(xiàn)izz1）表達(dá)相對(duì)升高（P<0.

6、05）。
　　5. RAW264.7細(xì)胞中，與對(duì)照組比，ODN1826引起因子 TNF-α的表達(dá)升高（P<0.05）；與ODN組比，IRS869可逆轉(zhuǎn)ODN1826引起的TNF-α的升高，使其降低（P<0.05）。
　　6.與對(duì)照組比，抑制TLR9后引起斑塊面積相對(duì)減少（P<0.05），并使斑塊易損性由3.7降到2.6（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. IRS869可抑制TLR9的表達(dá)及其下游NF-κB和I