接骨藥丸抑制脾多能干細(xì)胞源性破骨細(xì)胞樣細(xì)胞骨吸收作用的實(shí)驗(yàn)與臨床研究.pdf

1、第一部分：接骨藥丸抑制脾多能干細(xì)胞源性破骨細(xì)胞樣細(xì)胞骨吸收作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：通過(guò)建立體外破骨細(xì)胞培養(yǎng)體系，探討接骨藥丸抑制破骨細(xì)胞成熟分化及其骨吸收功能的效果。
　　方法：選取Wistar大鼠20只并隨機(jī)分為4組，實(shí)驗(yàn)組分別給予接骨藥丸藥液、骨碎補(bǔ)總黃酮藥液，而對(duì)照組給服阿侖膦酸鈉溶液，空白對(duì)照組則給予蒸餾水灌胃，每組均每天灌胃一次，持續(xù)14天后心臟取血，高速離心獲得含藥血清冷藏備用。無(wú)菌條件下取胎鼠的脾臟，仔細(xì)研磨

2、過(guò)濾，并在室溫下離心5min，棄去上清液，用α-MEM培養(yǎng)液制備成脾多能干細(xì)胞懸液并培養(yǎng)72小時(shí)。消化并獲得附壁細(xì)胞，再次高速離心并棄去上清液，用內(nèi)含sM-CSF和RANKL的培養(yǎng)液定容并制備出濃度為5×105/ml的細(xì)胞懸液。取6孔培養(yǎng)板8塊并分為4組，每組的培養(yǎng)孔中均分別提前放入了載玻片或骨片，并加入0.2ml細(xì)胞懸液，然后在加入相對(duì)應(yīng)的含藥血清后進(jìn)行培養(yǎng)，每日在倒置顯微鏡下觀看細(xì)胞生長(zhǎng)情況。在培養(yǎng)10天后，將載玻片取出進(jìn)行抗酒石酸

3、酸性磷酸酶染色后計(jì)數(shù)染色(+)的細(xì)胞數(shù)目，將骨片取出經(jīng)過(guò)固定、清洗后用1％甲苯胺藍(lán)進(jìn)行染色以顯示骨吸收陷窩并在光鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，通過(guò)SPSS17.0軟件運(yùn)用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：每組培養(yǎng)孔中的細(xì)胞生長(zhǎng)狀況良好，在7-9天時(shí)多核不規(guī)則細(xì)胞占據(jù)了大部分視野，且經(jīng)過(guò)TRAP染色后這些細(xì)胞表現(xiàn)出紅染等破骨細(xì)胞的特點(diǎn)，骨片上也出現(xiàn)了數(shù)目不等的藍(lán)染區(qū)域。接骨藥丸組(A組)及骨碎補(bǔ)總黃酮組(B組)的

4、兩組計(jì)數(shù)較之空白對(duì)照組(D組)均明顯減少并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為P<0.01及P<0.05)，但是B組與A組比較顯示又明顯遜色，t檢驗(yàn)結(jié)果P<0.01；而A組與阿侖膦酸鈉組(C組)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，A組在TRAP染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目及骨吸收陷窩數(shù)目均比C組偏少，而統(tǒng)計(jì)學(xué)分析也顯示這種減少具有顯著性差異(P<0.05)。
　　結(jié)論：本院自制中藥制劑接骨藥丸及骨碎補(bǔ)總黃酮均能抑制脾多能干細(xì)胞源性破骨細(xì)胞樣細(xì)胞的成熟與分化，并且對(duì)其骨吸收功能

5、也有顯著的遏制作用；但作為成方制劑的接骨藥丸，其功效較之骨碎補(bǔ)總黃酮卻又略勝一籌，側(cè)面反映了中藥方劑配伍理論的合理性；雖然接骨藥丸的組方初衷在于促進(jìn)骨折愈合，但其在抑制破骨細(xì)胞的活性及其骨吸收的功能方面也表現(xiàn)出良好的效果，當(dāng)然，這種效果較之阿侖膦酸鈉這類臨床最常用于抗骨質(zhì)疏松的藥物尚略顯不著。
　　第二部分：接骨藥丸治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的臨床研究
　　目的：研究本院自制方劑接骨藥丸治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的臨床療效，探討接骨藥丸

6、對(duì)原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥臨床治療的可行性和有效性，為該病的臨床用藥提供理論和實(shí)踐依據(jù)。
　　方法：收集2010年3月-2011年1月在山東省文登整骨醫(yī)院確診符合原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的患者76例。采用隨機(jī)數(shù)字的方法將患者隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組各38例。兩組患者分別于9AM給予患者阿侖膦酸鈉(固邦：10mg/片)一片和接骨藥丸(6g/袋)1袋。兩組均連續(xù)用藥三月后停藥。期間密切觀測(cè)肝腎功能等以保證用藥安全。分別于治療前后用骨密度儀檢測(cè)股骨上段W

7、ards三角骨密度變化，檢測(cè)包括血清鈣、磷、堿性磷酸酶及尿鈣/尿肌酐比值等骨代謝指標(biāo)。運(yùn)用骨質(zhì)疏松癥療效判定標(biāo)準(zhǔn)判別兩組的治療效果，并依據(jù)中醫(yī)證候療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)獲得中醫(yī)癥候改善狀況。
　　結(jié)果：治療組35例、對(duì)照組34例進(jìn)入結(jié)果分析。治療組在改善各項(xiàng)中醫(yī)癥候方面表現(xiàn)出了與對(duì)照組具有明顯差異的作用，而在骨代謝指標(biāo)對(duì)比方面，兩組在血鈣、磷及堿性磷酸酶水平均無(wú)明顯變化，唯有尿鈣/尿肌酐比值較治療前均明顯降低，骨密度值也較治療前明顯增加，但

8、是組間對(duì)比顯示，雖然兩組未表現(xiàn)出明顯差異，但對(duì)照組較治療組的改善作用明顯偏好。因此，最終在總有效率方面，治療組的總有效率為62.6％，而對(duì)照組的有效率卻為64.7％，兩組療效比較雖未表現(xiàn)出顯著性差異，但卻是對(duì)照組略勝了一籌。
　　結(jié)論：運(yùn)用中醫(yī)基礎(chǔ)理論指導(dǎo)接骨藥丸治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥，從整體辨證論治，能夠明顯改善患者的不適癥狀，但在促進(jìn)鈣質(zhì)沉積、提高骨密度方面等方面與阿侖膦酸鈉對(duì)比，可能并不具有明顯優(yōu)勢(shì)，合理的將接骨藥丸與阿侖膦酸