雷帕霉素抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的小鼠腹主動(dòng)脈瘤的機(jī)制研究.pdf

1、本文分兩個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分：雷帕霉素抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的小鼠腹主動(dòng)脈瘤
　　目的：明確雷帕霉素在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的小鼠腹主動(dòng)脈瘤中的作用及其分子病理機(jī)制。
　　方法：雄性載脂蛋白E（Apoe-/-）基因敲除小鼠隨機(jī)分為三組：生理鹽水組、血管緊張素Ⅱ組（AngⅡ皮下泵注1.44mg/kg/day）和雷帕霉素組(AngⅡ皮下泵注+雷帕霉素腹腔注射2mg/kg/day)。泵注完成時(shí)超聲檢測腎動(dòng)脈上水平的腹主動(dòng)脈

2、直徑。從小鼠主動(dòng)脈分離培養(yǎng)出原代血管平滑肌細(xì)胞，給予雷帕霉素與對(duì)照組比較。對(duì)小鼠主動(dòng)脈組織和血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)行Western blot和免疫組織化學(xué)分析。Image J和Graphpad軟件分別收集和處理數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：血管緊張素Ⅱ增加小鼠腎動(dòng)脈上水平腹主動(dòng)脈直徑，雷帕霉素顯著減輕血管緊張素Ⅱ?qū)Ω怪鲃?dòng)脈直徑的影響（p<0.0001）。組織學(xué)提示雷帕霉素減輕AngⅡ?qū)π∈笾鲃?dòng)脈膠原蛋白和彈力纖維結(jié)構(gòu)的損傷，且降低了AngⅡ誘導(dǎo)的小

3、鼠腹主動(dòng)脈中膜和外膜細(xì)胞凋亡水平。免疫組織化學(xué)發(fā)現(xiàn)AngⅡ組小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中ERK1/2表達(dá)(p=0.0013)及磷酸化水平(p=0.0098)均較對(duì)照組明顯增高，而雷帕霉素明顯降低血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的ERK1/2表達(dá)(p=0.0044)及活化水平(p=0.025)。雷帕霉素組血管平滑肌細(xì)胞收縮蛋白的表達(dá)增加。
　　結(jié)論：AngⅡ誘導(dǎo)的小鼠主動(dòng)脈瘤平滑肌細(xì)胞中ERK1/2的表達(dá)及活性水平上調(diào)。雷帕霉素有效抑制了AngⅡ誘導(dǎo)的小

4、鼠主動(dòng)脈瘤形成，可能與其降低VSMC中ERK1/2活性水平有關(guān)。
　　第二部分：ERK1/2抑制劑PD98059對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡的影響
　　目的：本研究的目的是評(píng)估ERK1/2抑制劑PD98059對(duì)小鼠血管平滑肌細(xì)胞的增殖和凋亡(VSMC)的影響以及ERK1/2和mTOR信號(hào)途徑在VSMC中的相互作用。
　　方法:不同濃度PD98059作用于小鼠VSMC檢測其時(shí)效與量效性，PI染色檢測細(xì)胞周期的變化，3-(4

5、,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide（MTT）檢測細(xì)胞增殖。VSMC凋亡使用anexinV和PI雙染色流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行評(píng)估。免疫印跡檢測mTOR途徑各蛋白的表達(dá)和活性。
　　結(jié)果:PD98059呈時(shí)間與劑量依賴性的顯著抑制VSMC增殖，同時(shí)促進(jìn)了VSMC的凋亡。在AngⅡ誘導(dǎo)VSMC凋亡時(shí)，PD98059有效地抑制VSMC凋亡。該過程中VSMC的p-TS