TDI-FP法檢測(cè)外周血EGFR基因突變與吉非替尼療效相關(guān)性研究.pdf

1、背景：
　　原發(fā)性支氣管肺癌是當(dāng)今社會(huì)中嚴(yán)重威脅人類健康的惡性疾病，發(fā)病率高，預(yù)后差。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（world health organization，WHO）2010年公布的資料顯示：肺癌的發(fā)病率為130萬(wàn)/年，死亡率為126萬(wàn)/年，位居全球惡性腫瘤之首。我國(guó)肺癌引起的死亡已占癌癥死因的20％以上，且逐年增高。
　　約80%肺癌患者的病理分型為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCL

2、C）。非小細(xì)胞肺癌早期癥狀不明顯，70%以上的患者確診時(shí)已錯(cuò)過(guò)手術(shù)治療時(shí)機(jī)，只能采取化療等方法治療。然而千人一方的標(biāo)準(zhǔn)化療僅對(duì)30%左右的NSCLC患者有效且毒副反應(yīng)較強(qiáng)，隨著藥物基因組學(xué)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)NSCLC存在多種遺傳變異亞型，因此根據(jù)遺傳變異亞型選擇更具針對(duì)性的個(gè)體化治療方案已成為提高NSCLC患者生存率的關(guān)鍵。
　　近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor recep

3、tor，EGFR）酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI）吉非替尼（Gefitinib）的應(yīng)用給NSCLC患者的治療帶來(lái)了福音。吉非替尼是分子靶向藥物，作用于腫瘤細(xì)胞，毒性小，能夠顯著提高NSCLC患者五年生存率。研究結(jié)果顯示EGFR基因外顯子19、21突變的NSCLC患者對(duì)吉非替尼更為敏感，EGFR基因檢測(cè)與吉非替尼治療效果存在密切的相關(guān)性。目前常用的EGFR基因測(cè)定方法是通過(guò)手術(shù)或纖維支氣管鏡取

4、病變部位組織，用DNA測(cè)序法或 ARMS等方法進(jìn)行檢測(cè)。但臨床上獲取晚期NSCLC患者的病變組織比較困難，常用于肺癌確診的纖支鏡檢查和經(jīng)皮穿刺等獲得的組織標(biāo)本量少，病理診斷后難以剩余足夠的組織再進(jìn)行基因突變的檢測(cè)。外周血取材方便，患者痛苦小，還可多次取用，若能夠通過(guò)檢測(cè)肺癌患者外周血中的基因突變，指導(dǎo)肺癌患者的靶向治療，將具有非常重要的臨床意義。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于檢測(cè)NSCLC患者外周血EGFR基因突變方法的報(bào)道層出不窮，但各有優(yōu)缺點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)

5、不一，結(jié)果不盡人意，探索便捷經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確性高的檢測(cè)外周血 EGFR基因突變的方法變得尤為重要。模板指導(dǎo)末端堿基摻入反應(yīng)結(jié)合熒光偏振技術(shù)（Template-directed Dye-terminator Incorporation Fluorescence polarization，TDI-FP）是一種特異性強(qiáng)、敏感度高的全新基因突變分析方法，其原理是在DNA模板引導(dǎo)下的引物末端延伸終止反應(yīng)，利用熒光偏振技術(shù)確定特異性引物或探針與目標(biāo)DNA

6、的雜交及特定位置摻入的堿基，從而判斷基因突變。該方法已在多種腫瘤基因突變的檢測(cè)上開始應(yīng)用，EGFR基因外顯子19、21發(fā)生的堿基缺失和替代突變，正是TDI-FP法易檢出的靶點(diǎn)。若可以通過(guò)TDI-FP法較靈敏地檢測(cè)NSCLC患者外周血EGFR基因突變情況，則可高效地指導(dǎo)NSCLC的個(gè)體化治療及準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)EGFR-TKI的療效。
　　目的：
　　1.驗(yàn)證TDI-FP法檢測(cè)晚期NSCLC患者外周血EGFR基因突變與DNA測(cè)序法檢測(cè)

7、NSCLC腫瘤組織中EGFR基因突變結(jié)果的一致性；
　　2.觀察 TDI-FP法檢測(cè) NSCLC患者外周血 EGFR基因突變與EGFR-TKI治療晚期NSCLC療效之間的關(guān)系，為臨床治療此類患者提供參考。
　　方法：
　　1.選取晚期NSCLC患者19例，分別采用TDI-FP法檢測(cè)外周血與DNA測(cè)序法檢測(cè)腫瘤組織中 EGFR基因突變情況，比較兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性；
　　2.選取不適合或拒絕化療的晚期NSCLC

8、病例51例，根據(jù)TDI-FP法檢測(cè)外周血 EGFR基因突變結(jié)果分為突變組和野生型組，所有患者均口服吉非替尼進(jìn)行治療（250mg/次，1次/日），比較兩組間無(wú)進(jìn)展生存期（progressive-free survival，PFS）、有效率（response rate，RR）和疾病控制率（disease control rate，DCR）。
　　結(jié)果：
　　1. TDI-FP法檢測(cè)外周血EGFR基因突變與標(biāo)準(zhǔn)DNA測(cè)序法檢測(cè)腫瘤

9、組織中的EGFR基因突變相比，19例NSCLC患者中，應(yīng)用DNA測(cè)序法共檢出10例突變，其中外顯子19缺失突變6例，外顯子21替代突變4例；TDI-FP法共檢出11例突變，其中外顯子19缺失突變6例，外顯子21替代突變5例。正確率π為84.2%，靈敏度為90.0%，特異度為77.8%，陽(yáng)性似然比為1.16，陰性似然比為0.45，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為81.8%，陰性預(yù)測(cè)值為87.5%，Youden指數(shù)為67.8%；
　　2. TDI-FP法

10、檢測(cè)出外周血EGFR突變患者31例，突變位點(diǎn)分別為外顯子19缺失突變18例（58.1%）及外顯子21替代突變13例（41.9%），突變陽(yáng)性率為60.8%（31/51）；野生型為20例。兩組經(jīng)吉非替尼治療后，突變組中位無(wú)進(jìn)展生存期為13.0月，RR為41.9%，DCR為77.4%；野生型組中位無(wú)進(jìn)展生存期為7.0月，RR為5.0%，DCR為15.0%；兩組間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. TDI-FP

11、法檢測(cè)外周血EGFR基因突變與組織DNA測(cè)序法有較高的一致性，且取材方便，特異性強(qiáng)，靈敏度高，便捷經(jīng)濟(jì)，可做為臨床檢測(cè)NSCLC患者EGFR基因突變的常用方法；
　　2.應(yīng)用TDI-FP法檢測(cè)NSCLC患者外周血中的EGFR基因突變，對(duì)于指導(dǎo)吉非替尼的臨床應(yīng)用有重要參考價(jià)值，使用吉非替尼治療TDI-FP法檢出的EGFR基因突變陽(yáng)性的晚期NSCLC患者具有顯著的療效；而吉非替尼對(duì)TDI-FP法檢出的EGFR基因野生型的NSCLC患者