長鏈非編碼RNA-TSLC1-AS1在人腦膠質瘤中的表達及功能研究.pdf

1、腦膠質瘤約占原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤的40％~50%,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的腫瘤。傳統(tǒng)的治療手段包括手術治療,放療和化療。但由于膠質瘤呈浸潤性生長,腫瘤組織與周圍正常腦組織界限不清,手術難以全切,效果不佳,且術后易復發(fā)。放療和化療常作為術后的輔助手段,不能特異的殺傷腫瘤細胞,同時還可能產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒副作用,因而腦膠質瘤的治療是神經(jīng)外科研究的難點之一。探索膠質瘤治療的新途徑,尤其是從基因水平闡明膠質瘤的發(fā)生、發(fā)展和演變機理,尋找有效的基因治

2、療的靶點是近年來神經(jīng)外科研究的的熱點。
　　長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類轉錄本長度大于200個核苷酸同時不編碼蛋白質的RNA。研究表明lncRNA可在表觀遺傳學,轉錄及轉錄后水平調(diào)控基因的表達,調(diào)控的方式包括染色體修飾,轉錄激活或干擾等。lncRNA與腫瘤存在密切的關系,一些lncRNA在正常組織與腫瘤組織中的表達存在顯著的差異性,異常的lncRNA可能在腫瘤的發(fā)生中起重要作用,有理由預測lncRNA可能成為腫瘤診斷和判

3、斷預后以及治療效果的一個新的標志物,同時lncRNA可以成為一個新的腫瘤基因治療的靶點。
　　目前關于lncRNA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中的報道甚少。許多研究表明,蛋白編碼基因TSLC1為腫瘤抑制基因,通常在許多腫瘤中被甲基化下調(diào),包括神經(jīng)膠質瘤,神經(jīng)母細胞瘤,肺癌,鼻咽腫瘤,惡性黑色素瘤,食管癌,肝癌,乳腺癌,胃癌,胰腺癌,大腸癌,子宮頸癌和前列腺癌。而TSLC1的反義轉錄本TSLC1-AS1作為lncRNA家族成員之一,在腦膠質瘤

4、中的表達及對膠質瘤發(fā)生、發(fā)展的作用尚未見報道。
　　本研究采用定量PCR方法檢測了30例腦膠質瘤組織、正常腦組織及人腦膠質瘤細胞系U87,U251,SNB19中l(wèi)ncRNA-TSLC1-AS1和mRNA-TSLC1的表達情況,研究TSLC1-AS1在腦膠質瘤組織與正常腦組織中表達的差異性,在不同級別腦膠質瘤中表達的差異性,及其與TSLC1表達的相關性。結果發(fā)現(xiàn)與正常腦組織相比,TSLC1-AS1和TSLC1在腫瘤組織中的表達水平明

5、顯下調(diào)(P<0.05)。在病理分級較高的腦膠質瘤組織中,TSLC1-AS1和 TSLC1的表達水平明顯低于在病理分級較低的腦膠質瘤組織中的表達水平(P<0.05)。TSLC1-AS1的表達與TSLC1的表達呈正相關(R=0.66,P<0.01)。上述結果提示TSLC1-AS1在人腦膠質瘤細胞中的表達水平顯著降低,其表達水平隨腦膠質瘤惡性程度的增高而降低,可作為腦膠質瘤診斷,臨床分級及判斷預后的分子指標。
　　在此基礎上構建了TSL

6、C1-AS1表達載體pcDNA-TSLC1-AS1,利用其轉染U87細胞株,獲得高表達TSLC1-AS1的U87細胞;應用MTS分析法檢測TSLC1-AS1表達升高對U87細胞增殖的影響。應用Transwell實驗檢測TSLC1-AS1表達升高對U87細胞遷移能力的影響。結果發(fā)現(xiàn)轉染了pcDNA-TSLC1-AS1的U87細胞系中TSLC1-AS1的表達上調(diào),明顯高于pcDNA control對照組(P<0.05),同時TSLC1的表達

7、也明顯上調(diào),高于pcDNA control對照組(P<0.05)。轉染pcDNA-TSLC1-AS1后24,48,72,96小時,U87細胞增殖率顯著低于對照組(P<0.05)。遷移度與對照組相比顯著減少(P<0.05)。此后,我們利用TSLC1-AS1 siRNA質粒轉染SNB19細胞株,獲得低表達TSLC1-AS1的SNB19,進一步驗證了TSLC1-AS1表達變化對膠質瘤細胞增殖與遷移能力的影響。
　　結果發(fā)現(xiàn)轉染了雙鏈TS

8、LC1-AS1-siRNA1及TSLC1-AS1-siRNA2的SNB-19細胞系中TSLC1-AS1的表達明顯下調(diào),在TSLC1-AS1-siRNA1干擾組中,TSLC1-AS1的表達下調(diào)約90%,明顯低于對照組(P<0.05),同時TSLC1的表達也明顯下調(diào),低于對照組(P<0.05)。在轉染了TSLC1-AS1-siRNA1正義鏈的SNB-19細胞系中TSLC1-AS1和TSLC1的表達明顯下調(diào),低于對照組(P<0.05)。而在轉

9、染了TSLC1-AS1-siRNA1反義鏈的SNB-19細胞系中,TSLC1的表達卻未見明顯下調(diào)(P>0.05)。該結果排除了TSLC1-AS1-siRNA1反義鏈對TSLC1的表達下調(diào)的脫靶效應,進一步確認了在SNB-19細胞系中下調(diào)TSLC1-AS1的表達可下調(diào)TSLC1的表達。用MTS法檢測轉染TSLC1-AS1-siRNA1及TSLC1-AS1-siRNA2后人腦膠質瘤細胞株SNB19的增殖能力,轉染TSLC1-AS1后24,4