骶神經(jīng)刺激對脊髓損傷大鼠腸道機械屏障保護機制的初步探討.pdf

1、腸道功能障礙已經(jīng)逐漸被認識到是影響脊髓損傷患者身心健康的一個重要因素。脊髓損傷后腸道功能障礙主要表現(xiàn)為腹痛、腹脹、便秘、大便失禁、自主反射失調(diào)。在嚴重的情況下，還將出現(xiàn)腸道細菌移位和內(nèi)毒素血癥，增加了全身炎癥反應綜合征和多器官功能障礙綜合征發(fā)生率。傳統(tǒng)治療方法主要包括飲食，生活方式的改變，藥物治療，以及行為和生物反饋治療。手術治療主要包括回、結腸造口術，馬龍順行性灌腸和骶神經(jīng)刺激器移植術。其中，骶神經(jīng)刺激成為最熱門的研究方向之一。骶神經(jīng)

2、電刺激能夠促進結腸蠕動和增加直腸內(nèi)壓，恢復正常的排便功能，對腸道的機械屏障起到保護作用，減少腸道細菌及內(nèi)毒素等有害物質(zhì)進入血液。但骶神經(jīng)電刺激對急性完全性脊髓損傷后腸道機械屏障的具體保護機制仍未被闡明，本實驗旨在初步探討骶神經(jīng)電刺激對急性完全性脊髓損傷大鼠腸道機械屏障的保護機制。
　　目的:實驗第一階段:研究不同骶神經(jīng)刺激電壓對脊髓損傷大鼠腸道的影響，尋求最佳的刺激參數(shù)。實驗第二階段:使用該最佳刺激電壓研究骶3神經(jīng)根電刺激對急性完

3、全性脊髓損傷大鼠腸道機械屏障的影響。揭示急性完全性脊髓損傷大鼠內(nèi)毒素和腸道菌群突破腸機械屏障的方式，初步探討骶神經(jīng)電刺激對急性完全性脊髓損傷大鼠腸道機械屏障的保護機制，以及對內(nèi)毒素血癥和細菌移位的防護作用，為臨床治療提供理論依據(jù)和治療的新思路。
　　方法:實驗第一階段:假手術組作為正常組，急性完全性脊髓損傷72h大鼠作為對照組，骶神經(jīng)電刺激組為實驗組，使用Fehling法制作大鼠急性完全性脊髓損傷模型，脊髓損傷后，于右側(cè)骶3神經(jīng)根

4、植入雙極電極，采用從低到高的刺激強度直到大鼠的尾巴和下肢出現(xiàn)顫抖性運動（閾值），以此為基礎，采用四個刺激電壓(1V、2V、4V、8V)，波頻15Hz，波寬固定為210μs，刺激時間10s，間歇時間20s，每次刺激10min，休息10min，共持續(xù)2h，每天上午8:00-10:00，下午6:00-8:00刺激急性完全性脊髓損傷72h大鼠右側(cè)骶3神經(jīng)根，觀察腸道變化情況，記錄結腸及直腸生物電活動，得出最佳刺激參數(shù)。實驗第二階段:假手術組作為

5、正常組，急性完全性脊髓損傷大鼠作為對照組，使用最佳刺激參數(shù)刺激急性完全性脊髓損傷大鼠骶3神經(jīng)根作為實驗組，對各組分別進行內(nèi)毒素測定，腸道淋巴結、肝臟、脾臟細菌培養(yǎng)，腸道形態(tài)學觀察、緊密連接蛋白ZO-1的蛋白表達測定，分析骶神經(jīng)電刺激對急性完全性脊髓損傷大鼠腸道機械屏障以及對內(nèi)毒素血癥和細菌移位的防護作用的具體機制。
　　結果:
　　1、實驗第一部分:實驗組和對照組腸道生物電峰值均低于正常組。但實驗組腸道生物電峰值均高于對照組

6、，其中刺激電壓4V組的腸道生物電峰值最接近正常組。
　　2、實驗第二部分:對照組大鼠脊髓完全性損傷后立即出現(xiàn)尿潴留，腹脹、小腸腸管脹氣、腸壁透光性增強;盲腸、結腸和直腸大量硬結糞便堆積、蠕動減弱;腸道黏膜出現(xiàn)不同程度損傷;腸道上皮細胞之間細胞連接出現(xiàn)溶解、缺失;內(nèi)毒素血癥含量和細菌移位的數(shù)量不斷的增多。實驗組大鼠電刺激后，腸道蠕動增強，糞便排出，腸道粘膜及細胞連接得到不同程度改善，腸道血清內(nèi)毒素水平出現(xiàn)不同程度的下降且細菌移位數(shù)量

7、呈顯著性減少。
　　3、各組大鼠腸道組織提取蛋白后，經(jīng)western-blot檢測緊密連接蛋白ZO-1的變化趨勢，結果證實，各組ZO-1蛋白水平的表達無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。各組大鼠腸道石蠟包埋切片后，經(jīng)免疫組化觀察緊密連接蛋白ZO-1的分布，發(fā)現(xiàn)隨著時間的推移對照組ZO-1的分布出現(xiàn)不同程度的散亂、排列不規(guī)則，實驗組ZO-1的分布得到不同程度的改善。
　　結論:
　　1、不同骶神經(jīng)刺激電壓均能夠改善脊髓損傷大鼠

8、腸道功能，其中刺激電壓4V對脊髓損傷后大鼠腸道功能的改善最明顯。
　　2、急性完全性脊髓損傷大鼠出現(xiàn)尿潴留、腹脹、脹氣、腸壁透光性增強、大量糞便堆積、蠕動減弱等腸道功能障礙。
　　3、急性完全性脊髓損傷大鼠的腸道上皮細胞、細胞連接等機械屏障遭到破壞，出現(xiàn)不同程度的內(nèi)毒素血癥和腸道菌群移位。
　　4、骶神經(jīng)電刺激能夠通過增強腸道的蠕動，排出腸內(nèi)容物，使腸道菌群數(shù)量減少，使上皮細胞、腸絨毛以及緊密連接等機械屏障破環(huán)得到不同