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1、目的:包裝帶有大鼠血管生成素-1(Angiopoeitin-1,Ang-1)基因之慢病毒載體,并感染大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)后,進(jìn)一步檢測(cè)Ang-1表達(dá),獲得有生物活性Ang-1修飾的rMSCs(Angl-rMSCs),并將其移植入動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠中,探討Ang-1基因修飾MSCs移植對(duì)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響。 方法:在脂質(zhì)體介導(dǎo)下,載體質(zhì)粒pSL-Amgl-IR
2、ES2-EGFP,與包裝質(zhì)粒HEILPER,包膜質(zhì)粒VSVG共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞包裝生產(chǎn)慢病毒。收集病毒上清進(jìn)行超速離心濃縮。PCR檢測(cè)病毒基因組中目的基因Ang-1的插入。將病毒上清感染rMSCs,通過(guò)熒光顯微鏡觀察報(bào)告基因的表達(dá)。球囊損傷+高脂飲食法構(gòu)建大鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化模型,頸動(dòng)脈粥樣硬化模型隨機(jī)分為3組,單純損傷組,(n=8)、Angl-rMSCs組(n=8)、pNL-rMSCs組(空載體組,n=8)。通過(guò)血管外膜下直接注射移植基
3、因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞。分別于2周及2個(gè)月后處死動(dòng)物,取頸動(dòng)脈組織,熒光顯微鏡觀察EGFP(+)細(xì)胞,Ⅷ因子免疫熒光觀察MSCs分化情況,HE染色檢測(cè)各組動(dòng)脈內(nèi)膜/中層比差別。 結(jié)果:三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后熒光激發(fā)可見(jiàn)大量綠色熒光。感染的Ang1-rMSCs、pNIL-rMSCs熒光激發(fā)后可見(jiàn)綠色熒光。感染的rMSCs移植入頸動(dòng)脈后均可在熒光顯微鏡下被檢出,Ⅷ因子免疫熒光提示rMSCs可分化成具有內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志的細(xì)胞系,pNL-
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