卵巢癌細(xì)胞與腹膜間皮細(xì)胞相互作用對(duì)侵襲轉(zhuǎn)移微環(huán)境的影響.pdf

1、第一部分卵巢癌細(xì)胞對(duì)腹膜間皮細(xì)胞(HPMC)Fn及HA表達(dá)的影響 目的：探討卵巢癌細(xì)胞對(duì)腹膜間皮細(xì)胞(HPMC)Fn及HA表達(dá)的影響。 方法：采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞SKOV3條件培養(yǎng)液(CM)中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)水平。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和ELISA分別檢測(cè)不同培養(yǎng)條件下HPMC Fn基因表達(dá)和細(xì)胞裂解液及各上清中Fn蛋白及HA水平。 結(jié)果：SKOV3-C

2、M中TGF-β1水平為(236.374±21.82)pg/ml。SKOV3-CM培育HPMC前(空白對(duì)照組)，HPMC Fn基因表達(dá)為1.334±0.14，細(xì)胞裂解液及CM中Fn水平分別為(173.694±16.16)ng/ml及(135.324±11.75)ng/ml，HA表達(dá)分別為(17.15±1.43)μg/ml及(7.36±0.82)μg/ml。SKOV3-CM培育HPMC后，HPMCFn基因表達(dá)為2.64+0.17，細(xì)胞裂解液

3、和CM中Fn水平為(297.694±28.02)ng/ml及(279.584±26.69)ng/ml，HA表達(dá)分別為(37.294±3.54)μg/ml及(18.57±1.93)μg/ml，均高于空白對(duì)照組(p<0.01)。SKOV3-CM中加入TGF-β1中和抗體培育HPMC后，HPMC Fn基因表達(dá)為1.904±0.12，細(xì)胞裂解液及CM中Fn水平分別為(231.644±22.18)ng/ml及(212.03±19.54)ng/ml

4、，HA水平分別為(25.53±2.49)μg/ml及(12.164±1.10)μg/ml，均低于SKOV3-CM組(1P<0.01)，但仍高于空白對(duì)照組(p<0.05)。 結(jié)論：卵巢癌細(xì)胞可誘導(dǎo)HPMC表達(dá)Fn及HA，分泌TGF-β1是卵巢癌細(xì)胞作用HPMC的途徑之一。第二部分卵巢癌細(xì)胞與HPMC相互作用對(duì)癌細(xì)胞MMPs及TIMPs表達(dá)的影響目的：探討卵巢癌細(xì)胞與HPMC相互作用對(duì)癌細(xì)胞MMPs及TIMPs表達(dá)的影響。

5、 方法：用RT-PCR和ELISA分別檢測(cè)不同條件下的HPMC-CM對(duì)SKOV3MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2基因和蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：用無(wú)血清培養(yǎng)液培育SKOV3(空白對(duì)照組)，SKOV3幾乎檢測(cè)不到MMP-2基因及蛋白的表達(dá)，MMP-9基因表達(dá)為1.40a±0.04，蛋白水平為(14.54±1.61)ng/ml；TIMP-1及TIMP-2基因表達(dá)分別為0.49±0.12，0.63+0.14；蛋白表

6、達(dá)分別為(5.73±0.97)ng/ml，(7.22±1.01)ng/ml。用SKOV3-CM培育HPMC前所得的HPMC-CM(HPMC-CM<,1>)培育SKOV3，SKOV3 MMP-2及MMP-9基因表達(dá)分別為0.23±0.01，2.66±0.07；蛋白表達(dá)分別為(14.97±0.83)ng/ml，(37.19±3.52)ng/ml，均高于空白對(duì)照組(P<0.01)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表達(dá)與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯

7、差別(P>0.05)。用SKOV3-CM培育HPMC后所得的HPMC-CM(HPMC-CM<,2>)培育SKOV3，SKOV3 MMP-2及MMP-9基因表達(dá)分別為0.47±0.02，4.28±0.09；蛋白表達(dá)分別為(39.28±3.55)ng/ml，(62.03±5.34)ng/ml，均高于HPMC-CM<,1>組(P<0.01)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表達(dá)與HPMC-CM<,1>組相比均無(wú)明顯差別(P>0.05)。用

8、SKOV3-CM+TGF-β1中和抗體培育HPMC后所得的HPMC-CM(HPMC-CM<,3>)培育SKOV3，SKOV3 MMP-2及MMP-9基因表達(dá)分別為0.33±0.02，3.52±0.08；蛋白表達(dá)分別為(27.59±1.94)ng/ml，(49.95±4.14)ng/ml，均低于HPMC-CM<,2>組(P<0.05)，但仍高于HPMC-CM<,1>組(P>O.05)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表達(dá)與HPMC-

9、CM<,2>組及HPMC-CM<,1>組相比均無(wú)明顯差別(p>0.05)。HPMC-CM<,l>+Fn抗體培育SKOV3后，其MMP-2及MMP-9基因表達(dá)分別為0.14±0.01，1.82±0.06；蛋白表達(dá)分別為(8.76±0.68)ng/ml，(25.83±2.48)ng/ml，均低于HPMC-CM<,l>組(P<0.01)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表達(dá)與HPMC-CM<,l>組相比均無(wú)明顯差別(p>0.05)。HPM

10、C-CM<,l>+HAase培育SKOV3后，其MMP-2及MMP-9基因表達(dá)分別為O.16±0.02，1.93±0.15；蛋白表達(dá)分別為(9.03±1.17)ng/ml，(26.56±3.42)ng/ml，均低于HPMC-CM<,l.組(P>0.01)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表達(dá)與HPMC-CM<,l>組相比均無(wú)明顯差別(P>0.05)。HPMC-CM<,l>+Fn抗體+HAase培育SKOV3后，其MMP-2及MMP-

11、9基因表達(dá)分別為0.09±0.01，1.64±0.09；蛋白表達(dá)分別為(4.53±0.56)ng/ml，(19.38±2.46)ng/ml，均低于HPMC-CM<,l>+Fn抗體組及HPMC-CM<,l>+HAase組(P均<0.01)：TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表達(dá)與HPMC-CM<,l>+Fn抗體組及HPMC-CM<,l>+HAase組相比均無(wú)明顯差別(P>0.05)。± 結(jié)論：卵巢癌細(xì)胞作用HPMC后，HPMC誘導(dǎo)