腸球菌肽脫甲?；竝df基因的分離與酶活性研究及以PDF為靶點的高通量新藥篩選模型的建立與應用.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩98頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、本研究采用生物信息學方法將已知大腸桿菌、肺炎鏈球菌的PDF氨基酸序列與NCBI Gene bank中部分測序的腸球菌(Enterococcus faecium)基因組進行BLAST比較,獲得腸球菌PDF同源序列.在該同源序列中含有其他微生物PDF酶活性必須的三個保守基序:Motif1{GXGXAAXQ}、Motif2{EGCLS}和Motif3{HEXDH}.通過基因序列比對分析,確定腸球菌中PDF同源序列的開放閱讀框(open rea

2、ding frame,ORF),用PCR擴增出該開放閱讀框并進行測序分析.該擴增的腸球菌PDF同源序列與原核蛋白表達載體pET-30-a(+)連接后,轉化蛋白表達宿主大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導表達.純化誘導表達蛋白,使純度達到90%以上.腸球菌PDF酶活性分析包括:酶與甲?；牡孜颋or-Met-Val-Ser相互作用的動力學特點,以及溫度、pH對酶活力的影響.通過酶活性研究與Western blot分析證實了所獲得的腸

3、球菌PDF同源序列即為腸球菌的肽脫甲?；富?并將首次分離得到的腸球菌pdf登入NCBI Gene bank(Gene bank Accession number AY238515).以純化的腸球菌PDF為靶點,首次建立了體外篩選其拮抗劑的分子高通量篩選模型,并用此模型篩選了近10,000個樣品,其中化合物樣品為2,000個,微生物發(fā)酵液樣品為8,000個.在近10,000樣品中,獲得10個抑酶陽性樣品,其中微生物發(fā)酵液樣品8個,化合

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論