超聲空化效應促人骨髓間充質(zhì)干細胞體內(nèi)歸巢的實驗研究.pdf

1、第一部分骨髓間充質(zhì)干細胞中環(huán)氧化酶2及聚蛋白多糖酶1沉默與胰島素樣生長因子1表達
　　【目的】觀察攜帶基因環(huán)氧化酶2、聚蛋白多糖酶1的 shRNA干擾載體和攜帶胰島素樣生長因子1的過表達慢病毒載體在骨髓間充質(zhì)干細胞中的表達情況。
　　【方法】應用重組慢病毒技術(shù)構(gòu)建攜帶沉默基因環(huán)氧化酶2、聚蛋白多糖酶1、過表達基因胰島素樣生長因子1和綠色熒光蛋白基因的重組慢病毒表達載體，并用其轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的第三代人骨髓間充質(zhì)干細胞（實驗組），

2、并以無目的基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細胞和未做處理的人骨髓間充質(zhì)干細胞分別作為陰性對照組和空白組進行對比。
　　【結(jié)果】慢病毒轉(zhuǎn)染3d后，熒光顯微鏡下可見人骨髓間充質(zhì)干細胞發(fā)出綠色熒光，陰性對照組、實驗組轉(zhuǎn)染效率均達90％以上。RT-PCR、Western blot和ELISA檢測結(jié)果顯示，環(huán)氧化酶2和聚蛋白多糖酶1在人骨髓間充質(zhì)干細胞的基因和蛋白水平有受到了明顯抑制，胰島素樣生長因子1基因和蛋白水平的表達均高于陰性對照組

3、及空白組。
　　【結(jié)論】應用慢病毒可在人骨髓間充質(zhì)干細胞成功沉默環(huán)氧化酶2和聚蛋白多糖酶1基因，同時將胰島素樣生長因子1高表達，為系統(tǒng)性治療類風濕性關節(jié)炎帶來新的希望。
　　第二部分超聲空化效應促人骨髓間充質(zhì)干細胞體內(nèi)歸巢的實驗研究
　　【目的】研究觀察超聲空化效應對慢病毒介導 hCOX-2 shRNA、hAggrecanse-1shRNA、hIGF-1基因轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細胞移植的可行性及干細胞在兔關節(jié)炎模型體內(nèi)歸

4、巢的影響。
　　【方法】關節(jié)炎模型造模成功的新西蘭兔分為3組：轉(zhuǎn)染基因人骨髓間充質(zhì)干細胞+微泡+超聲組（實驗組）、轉(zhuǎn)染基因人骨髓間充質(zhì)干細胞+超聲組（對照組）、轉(zhuǎn)染基因人骨髓間充質(zhì)干細胞+無處理組（空白組），移植細胞后檢測兔后肢膝關節(jié)滑膜組織學觀察及RT-PCR基因檢測。
　　【結(jié)果】超聲空化效應可以增加慢病毒介導hCOX-2 shRNA、hAggrecanse-1shRNA、hIGF-1基因轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細胞在兔關節(jié)炎