細(xì)顆粒物對(duì)H9c2心肌細(xì)胞生長及β1受體基因甲基化并表達(dá)的影響.pdf

1、目的：1．研究細(xì)顆粒物(PM2.5)對(duì)心肌細(xì)胞活力的影響。2．研究PM2.5對(duì)心肌細(xì)胞β1受體表達(dá)的影響，并探討其可能機(jī)制。
　　 方法：本次研究收集本市大氣非工業(yè)區(qū)PM2.5，采樣日期為2010年12月-2011年3月。以H9c2大鼠心肌細(xì)胞作為研究對(duì)象。用不同濃度的PM2.5水溶性及非水溶性成分干預(yù)24h。設(shè)定1μg/ml為低濃度、10μg/ml為中濃度、100μg/ml為高濃度。在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，用MTT法測(cè)定細(xì)

2、胞存活率。用甲基化特異性PCR(MSP)測(cè)定β1受體基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化修飾水平。用RT-PCR、熒光定量PCR法分析該基因mRNA表達(dá)的差異。用Western Blot法測(cè)定蛋白表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1．PM2.5對(duì)心肌細(xì)胞活力的影響：PM2.5干預(yù)H9c2心肌細(xì)胞后，細(xì)胞存活率在對(duì)照組為100.0(％)，水溶性成分組低、中、高濃度時(shí)分別為95.0±2.5(％)、89.0±2.3(％)、84.0±2.8(％)

3、；非水溶性成分組低、中、高濃度時(shí)分別為95.8±2.5(％)、82.6±2.2(％)、57.7±2.0(％)。顯示：在1-100μg/ml范圍內(nèi)，細(xì)胞活性隨著PM2.5濃度的增加受到了明顯的抑制，和對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。相同濃度下，非水溶成分對(duì)細(xì)胞活力的影響較水溶性成分明顯(P＜0.05)。
　　 2.PM2.5對(duì)心肌細(xì)胞β1受體基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化修飾水平的影響：PM2.5干預(yù)H9c2心肌細(xì)胞后，β1受

4、體基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化修飾狀態(tài)在對(duì)照組為69.71±1.63(％)，水溶性成分組時(shí)低、中、高濃度時(shí)分別為68.00±1.49(％)、61.00±1.21(％)、55.94±1.53(％)；非水溶性成分組低、中、高濃度時(shí)分別為62.09±1.45(％)、49.06±0.96(％)、36.78±2.22(％)。顯示：在1-100μg/ml范圍內(nèi)，隨PM2.5濃度增高，β1受體基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化率逐漸減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

5、相同濃度下，非水溶成分對(duì)DNA甲基化的影響較水溶性成分明顯(P＜0.05)。
　　 3．PM2.5對(duì)心肌細(xì)胞β1受體mRNA和蛋白表達(dá)的影響：PM2.5干預(yù)H9c2心肌細(xì)胞后，mRNA相對(duì)表達(dá)量(2-ΔΔCt)在對(duì)照組為1。水溶性成分組低、中、高濃度時(shí)分別為1.08±0.06、1.27±0.05、1.71±0.10;非水溶性成分組低、中、高濃度時(shí)分別為1.30±0.05、2.28±0.14、5.70±0.23。顯示：在1-100

6、μg/ml范圍內(nèi)，隨PM2.5濃度增高，β1受體mRNA表達(dá)增高，和對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。相同濃度下，非水溶成分β1受體mRNA表達(dá)較水溶性成分明顯(P＜0.05)。但在水溶性及非水溶性成分組，隨PM2.5濃度增高，蛋白表達(dá)未見明顯差異(P＞0.05)；相同濃度時(shí)，兩種成分干預(yù)后，蛋白表達(dá)亦無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1．PM2.5可導(dǎo)致H9c2心肌細(xì)胞活力減低，并呈劑量依賴