DEL型紅細胞輸注RhD陰性患者抗-D抗體調(diào)查分析.pdf

1、目的:因為DEL型紅細胞膜上的D抗原數(shù)量非常少,只有通過敏感的吸收放散試驗才能檢出。近年來,DEL的臨床輸血安全問題受國際關(guān)注,日本和韓國先后報道了“亞洲型”DEL導(dǎo)致RhD陰性患者產(chǎn)生的抗-D免疫反應(yīng)(初次和回憶反應(yīng)),國內(nèi)僅2001年觀察到1例真實RhD陰性患者輸注DEL紅細胞后產(chǎn)生抗-D同種抗體,但更多文獻報道真實RhD陰性患者在接受DEL供者紅細胞后沒有發(fā)生輸血反應(yīng),也未檢測到抗-D。追蹤臨床接受DEL紅細胞的RhD陰性患者20

2、例,觀察臨床輸血反應(yīng),檢測其血清中有無抗-D抗體的產(chǎn)生,探討DEL型個體弱表達D抗原的臨床免疫原性。
　　方法:
　　1.供者DEL紅細胞的篩查。RhD-DEL型是從血清學角度定義的,由IAT確認的RhD陰性經(jīng)吸收-放散試驗檢測為D抗原陽性。對供者血細胞采用血型血清學檢測,包括鹽水法、間接抗人球蛋白法、吸收放散試驗篩選DEL型紅細胞。DEL紅細胞臨床相關(guān)的抗原主要有D、C、c、E和e等5種,可以采用相應(yīng)的單克隆抗血清來鑒定。

3、
　　2.輸注DEL型紅細胞的RhD陰性患者血型鑒定和抗-D抗體檢測。為了觀察DEL表達D抗原的免疫原性,追蹤臨床接受DEL紅細胞的RhD陰性患者,采集患者輸血后6個月內(nèi)的EDTA﹒K2抗凝血,共20例,男10例,女10例,年齡為14~78歲,平均38.75歲。對患者紅細胞采用血型血清學檢測(包括鹽水法、抗人球蛋白法、吸收放散試驗)和血型的分子生物學檢測。分子生物學檢測采用天根血液基因組DNA提取試劑盒提取DNA,采用試劑盒Rea

4、dy gene Drag(inno-Trin Blood Group SSP)PCR-SSP擴增,產(chǎn)物用2％瓊脂糖凝膠電泳檢測,通過凝膠成像儀成像。對患者血清采用凝聚胺法、間接抗球蛋白試驗和微柱凝膠法篩查不規(guī)則抗體,然后對篩查陽性的標本通過譜細胞進行不規(guī)則抗體鑒定,并進行效價滴定。
　　結(jié)果:1.2010年1月至2011年3月安徽省血液中心獻血者共檢測421例RhD確認陰性標本。吸收放散試驗檢出DEL108例,比例為25.6%;R

5、hD真陰性313例,比例為74.4%。對108例DEL樣本進行RhCcEe因子測定,結(jié)果顯示85.2%的樣本中含有C抗原。
　　2.20例患者紅細胞血清學檢測5例為DEL型,占25%;15例為RhD真陰性,占75%。PCR-SSP擴增顯示5例DEL型都含有RhD基因(K409K)。5例DEL型患者無論男女都未檢測出抗-D抗體,抗-D抗體陽性的患者都為RhD真陰性。
　　患者血清檢測出2例女性標本不規(guī)則抗體為陽性,效價分別為3

6、2和512,所有男性血清中都未發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體。譜細胞鑒定不規(guī)則抗體都為抗-D抗體。其中1例為第一次輸血的妊娠女性,22歲,其兒子血樣 RhD為陽性,提示母體內(nèi)抗體可能為妊娠引起;另1例女性,36歲,輸DEL紅細胞前后其血清抗-D抗體都為陽性,調(diào)查其病歷發(fā)現(xiàn)生育史5次,曾于1997年產(chǎn)下一女嬰,女孩健在,此次輸入DEL2u,也未發(fā)生輸血反應(yīng),輸血前后抗-D抗體效價都為512,膽紅素也未見明顯變化,輸血2周后出院。
　　結(jié)論:1.“亞

7、洲型”DEL表型個體通常為C抗原陽性個體,C抗原可作為初篩“亞洲型”DEL的1個重要標志。
　　2.在本次調(diào)查的20例樣本中,DEL型的個體未檢出抗-D抗體,產(chǎn)生抗-D抗體的個體未檢出DEL型,提示DEL個體可能不會被誘導(dǎo)產(chǎn)生同種免疫抗-D抗體。
　　3.本次調(diào)查所有男性RhD陰性患者接受DEL紅細胞后都未產(chǎn)生抗-D抗體,1例含有抗-D抗體的RhD真陰性女性接受DEL紅細胞后臨床也未出現(xiàn)輸血反應(yīng),提示DEL紅細胞導(dǎo)致RhD陰