水通道蛋白8對膿毒癥大鼠肝細胞線粒體形態(tài)的影響.pdf

1、膿毒癥(sepsis) 是指感染引起的全身性炎癥反應綜合征(systemic infla-mmatory response syndrome, SIRS),是危重癥患者病死的主要原因之一,進一步發(fā)展可引起重癥膿毒癥(severe sepsis)膿毒癥休克(septic shock)和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunc-tion syndrome, MODS)?肝臟是膿毒癥狀態(tài)下最易受累的器官之一,肝功能不

2、全是膿毒癥發(fā)展為多器官功能衰竭(multiple organ failure,MOF)的早期表現(xiàn)之一?膿毒癥的發(fā)病機制尚不十分明確,可能的發(fā)病機制包括：炎癥因子風暴?凝血系統(tǒng)紊亂和微循環(huán)障礙?免疫抑制、線粒體功能障礙和機體氧供與氧耗失衡等?肝細胞線粒體是機體營養(yǎng)物質和能量代謝中心,線粒體功能障礙在膿毒癥狀態(tài)下,尤其是膿毒癥休克患者的病情發(fā)展中起著很重要的作用?水通道蛋白8(aquaporin-8,AQP8)是在肝細胞線粒體內膜(inne

3、r mitochondria membrane,IMM)上表達的一種水分子通道,是具有高度選擇性和高效轉運水分子的特異孔道,對維持肝細胞線粒體的結構和功能具有較大的影響?本研究使用盲腸結扎穿孔法制備膿毒癥大鼠模型,旨在探討膿毒癥造成肝細胞線粒體形態(tài)的變化,以及線粒體內膜AQP8在膿毒癥介導的肝損傷中的所發(fā)揮的作用?
　　目的：
　　研究膿毒癥狀態(tài)下水通道蛋白8(AQP8)在肝細胞線粒體膜上表達程度對線粒體形態(tài)變化的影響,為進

4、一步探尋改善線粒體膜AQP8蛋白表達的方法,以期能起到對膿毒癥介導肝損傷的保護作用?
　　方法：
　　24只SD大鼠隨機分為2組:對照組和膿毒癥組,每組12只?采用盲腸結扎穿孔術制備膿毒癥實驗動物模型,對照組進行假手術,完成除盲腸結扎穿孔外的實驗過程?觀察兩組動物的體溫?呼吸頻率?心率變化和對外界刺激的反應,達到膿毒癥診斷標準后繼續(xù)觀察1h,然后在麻醉后用斷頭法處死實驗大鼠;取出大鼠肝臟,一部分新鮮肝臟用于制作電鏡標本,進行

5、超微結構觀察,另一部分肝臟用于提取線粒體,后采用Western-blotting法測定線粒體AQP8蛋白表達水平,并用RT-PCR法檢測肝細胞線粒體AQP8mRNA水平?采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析?計量資料采用單因素方差分析(one-wayANOVA)?
　　結果：
　　1.線粒體超微結構變化
　　對照組肝細胞膜邊界清楚?完整,內質網及線粒體數目較多且形態(tài)正常?而膿毒癥組肝細胞線粒體顯著腫脹?嵴變寬?短,并出

6、現(xiàn)線粒體膜破裂,內質網也出現(xiàn)擴張?斷裂及空泡化?
　　2.肝細胞線粒體AQP8蛋白表達
　　以prohibitin作為內參,用AQP8/prohibitin表示AQP8蛋白相對表達水平,將對照組的AQP8蛋白相對表達水平設為1,計算出膿毒癥組(n=12)AQP8蛋白相對表達水平為0.61±0.08,較對照組減少平均約39％,差異有顯著統(tǒng)計學意義(F=62.71,P<0.01)?
　　3肝細胞線粒體AQP8mRNA的表達

7、
　　以β-actin作為內參,AQP8/β-actin表示AQP8mRNA相對表達量,將對照組的AQP8mRNA相對表達水平設為1,膿毒癥組AQP8mRNA相對表達量為1.59±0.24;AQP8mRNA表達較對照組增加平均約59%,差異有顯著統(tǒng)計學意義(F=67.85,P<0.01)?
　　結論：
　　1.采用盲腸結扎穿孔術可以成功制備大鼠膿毒癥模型;
　　2.膿毒癥可以介導急性肝損傷,肝細胞線粒體超微結構發(fā)