Bortezomib增強EGCG、雷利度胺和三氧化二砷對骨髓瘤細胞凋亡作用機制的研究.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤是(multiple myeloma，MM)是一種起源于B細胞系的惡性腫瘤，其特征為產(chǎn)生單克隆免疫球蛋白的異常漿細胞增多，并在骨髓內惡性增殖，引起骨折和骨髓功能衰竭，產(chǎn)生臨床癥狀。如果不進行治療，進展期MM患者的中位生存期僅為6個月。接受傳統(tǒng)化療，中位生存期也不超過3年，僅有25％的患者可以生存5年以上。因此MM目前仍是一種不可治愈的疾病。近幾年來，隨著對MM發(fā)病機理的深入研究，人們研制出一些新的靶向治療藥物，如：蛋白酶體抑

2、制劑(proteasome inhibitor)、免疫調節(jié)劑(immunemodulator)等新藥，療效明顯增加，但是疾病復發(fā)及耐藥仍是影響療效的重要因素。為了尋求新的治療藥物及方法，提高單藥或聯(lián)合用藥對MM的治療效果。我們分別對EGCG((-)epigallocatechin-3-gallate，又稱表沒食子兒茶素沒食子酸酯，是綠茶兒茶素的主要成分)、雷利度胺(Lenalidomide)、三氧化二砷(Arseruc Trioxide

3、，ATO，As2O3)三種藥物及分別聯(lián)合硼替佐米(Bortezomib，Velcade，PS341)對多發(fā)性骨髓瘤KM3細胞的促凋亡機制進行了研究。目的是觀察這三種藥物及與硼替佐米聯(lián)合有無增強誘導MM細胞凋亡的作用，并初步探討其機制，為以后臨床聯(lián)合用藥增強Bortezomib的作用、克服耐藥性提供理論基礎。
　　 主要研究方法和結果：
　　 1.應用臺盼藍拒染法檢測EGCG及聯(lián)合硼替佐米對KM3細胞生長抑制的影響。應用流

4、式細胞術檢測細胞凋亡。應用SYBR Green Realtime-PCR方法檢測P65基因的表達情況。應用Western Blotting技術檢測P65蛋白、磷酸化P65蛋白(pP65)、PARP、及caspase3-，8-，9蛋白的表達變化。結果顯示EGCG可以抑制KM3細胞生長，抑制P65基因及其蛋白的表達，并通過激活caspase誘導細胞凋亡。當與Bortezomib聯(lián)合時有協(xié)同作用。
　　 2.應用臺盼藍拒染法檢測雷利度

5、胺及聯(lián)合硼替佐米對KM3細胞生長抑制的影響。應用流式細胞術檢測細胞凋亡。應用RT-PCR(reverse transcription-polymerasechain reaction)方法檢測P65基因的表達情況。應用Western Blotting檢測P65，pP65，PARP，caspase3-，8-，9蛋白的表達變化。結果顯示雷利度胺可以抑制KM3細胞生長，抑制P65基因及其蛋白的表達并激活caspase-8誘導細胞凋亡。當與Bo

6、rtezomib聯(lián)合時有協(xié)同作用。
　　 3.應用臺盼藍拒染法檢測三氧化二砷及聯(lián)合硼替佐米對KM3細胞生長抑制的影響。應用流式細胞術檢測細胞的凋亡比例。應用RT-PCR方法檢測P65基因的表達變化。應用Western Blotting檢測P65，pP65，PARP.caspase-3，-8，-9蛋白的表達變化。結果顯示三氧化二砷可以抑制KM3細胞生長、對P65基因及其蛋白沒有顯著影響，主要是通過激活caspase-3，-8，-9

7、，誘導細胞凋亡。當與Bortezomib聯(lián)合時有協(xié)同作用。
　　 結論及研究意義：
　　 1.EGCG單獨作用于KM3細胞可以抑制其生長并誘導細胞凋亡，與Bortezomib聯(lián)合時有協(xié)同效應。
　　 2.雷利度胺單獨作用于KM3細胞可以抑制其生長并誘導細胞凋亡，與Bortezomib聯(lián)合時有協(xié)同效應。
　　 3.三氧化二砷單獨作用于KM3細胞可以抑制其生長并誘導細胞凋亡，與Bortezomib聯(lián)合時有協(xié)同