SLC26A6和Corin在不明原因心臟性猝死心肌組織中表達(dá)的初步觀察.pdf

1、背景：心臟性猝死（Sudden cardiac death，SCD）嚴(yán)重威脅著人類的生命安全，是猝死發(fā)生的重要原因，SCD現(xiàn)已成為世界各國(guó)研究和預(yù)防的重要課題。在法醫(yī)病理學(xué)檢案中，絕大部分SCD案例通過(guò)全面細(xì)致的法醫(yī)病理學(xué)檢查均能檢見(jiàn)相關(guān)器質(zhì)性改變，但是仍有一部分 SCD案件未能找到致死性病理學(xué)改變，稱為陰性解剖（Negative autopsy）或不明原因心臟性猝死（Sudden unexplained cardiac death,S

2、UD）。目前對(duì)于SUD的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，研究表明SUD的發(fā)生可能與編碼相關(guān)離子通道的基因異常表達(dá)有關(guān)。
　　既往研究發(fā)現(xiàn)心臟中酸堿平衡的改變可對(duì)心肌細(xì)胞興奮-收縮偶聯(lián)產(chǎn)生重要影響，并能導(dǎo)致心臟功能障礙或心律失常。溶質(zhì)載體家族6成員6-SLC26A6（PATI，Putative Anion Transporter-1)是溶質(zhì)載體（SLC）家族的成員之一，是小鼠心臟中的Cl--HCO3-交換器。Corin是跨膜絲氨酸蛋白酶(TMPR

3、SSs)的四大亞家族之一，主要存在于心臟的心房和心室肌細(xì)胞上。Corin可將心肌細(xì)胞中心鈉肽前體（Pro-atrial natriuretic peptide，pro-ANP）與腦鈉肽前體（pro-brain natriuretic peptide，pro-BNP）經(jīng)過(guò)適當(dāng)酶切后轉(zhuǎn)化成有活性的心鈉肽（atrial natriuretic peptide，ANP）和腦鈉肽（brain natriuretic peptide，BNP），發(fā)揮

4、血壓調(diào)節(jié)和改善心臟功能的作用，Corin缺乏可能與原發(fā)性高血壓、心室肥厚和心力衰竭等疾病存在關(guān)聯(lián)性。但目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)人類 SUD者心肌組織中SLC26A6和Corin表達(dá)的相關(guān)研究。
　　目的：通過(guò)免疫熒光技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)初步觀察SLC26A6和Corin在不同致死原因下表達(dá)水平的差異，分析SLC26A6和Corin與SUD之間的關(guān)系，為后續(xù)SUD的研究提供參考。
　　方法：選擇湖北同濟(jì)法醫(yī)學(xué)司法鑒定中

5、心2012年3月至2013年5月間10例SUD者冰凍心肌組織組成SUD組，4例蛛網(wǎng)膜下腔出血死亡者、3例過(guò)敏性休克死亡者和4例機(jī)械性窒息死亡者冰凍心肌組織共11例組成其他原因致死組。首先，采用全基因表達(dá)譜芯片篩選出SUD組和其他原因致死組間差異性上調(diào)和下調(diào)基因。將熒光標(biāo)記Cy5/Cy3的比值<0.5，F(xiàn)DR小于0.05，fold change<1.2的基因判斷為上調(diào)基因：反之則為下調(diào)基因，挑選SLC26A6（上調(diào)）和Corin（下調(diào)）基

6、因作進(jìn)一步研究；其次，使用免疫熒光技術(shù)觀察 SUD組與其他原因致死組間心肌組織中SLC26A6和Corin表達(dá)水平；再次，運(yùn)用Real-time PCR技術(shù)分析SUD組與其他原因致死組間SLC26A6和Corin的RNA相對(duì)表達(dá)量；最后應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析兩組間SLC26A6和Corin表達(dá)水平差異。
　　結(jié)果：在總共包含44170個(gè)基因本的全基因表達(dá)譜芯片中，標(biāo)化后共測(cè)出28770個(gè)基因，SLC26A6和Corin分別為SUD組和

7、其他原因致死組間上調(diào)和下調(diào)基因。SLC26A6免疫熒光結(jié)果:SLC26A6在 SUD組的左右心房肌和心室肌、乳頭肌和室間隔細(xì)胞膜上均見(jiàn)橙黃色陽(yáng)性熒光表達(dá)，心肌間質(zhì)纖維呈弱陽(yáng)性橙黃色顆粒表現(xiàn)。其他致死組的SLC26A6熒光也在左右心房肌和心室肌、乳頭肌和室間隔細(xì)胞膜上檢見(jiàn)。SUD組與其他原因致死組間平均熒光強(qiáng)度值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Corin熒光結(jié)果:SUD組的Corin沿左右心房肌和心室肌、乳頭肌和室間隔細(xì)胞膜分布。其他

8、原因致死組中Corin大量表達(dá)于心肌細(xì)胞膜上，心房肌和心室肌細(xì)胞膜上均能見(jiàn)強(qiáng)熒光圖形,乳頭肌和室間隔細(xì)胞膜上熒光強(qiáng)度弱于心房肌和心室肌細(xì)胞膜上熒光強(qiáng)度。SUD組平均熒光強(qiáng)度弱于其他原因致死組的心房肌和心室肌細(xì)胞膜上平均熒光強(qiáng)度(P<0.05)。Real-time PCR結(jié)果中，SUD組SLC26A6的RNA相對(duì)表達(dá)含量顯著高于其他原因致死組(P<0.05)，SUD組中Corin的RNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于其他原因致死組(P<0.05)。<

9、br>　　結(jié)論：（1）本課題首次在人類SUD心臟組織中觀察SLC26A6和Corin的表達(dá)；（2）免疫熒光技術(shù)顯示SLC26A6和Corin主要表達(dá)于心房和心室肌細(xì)胞膜上；（3）SLC26A6在SUD者心肌組織中免疫熒光呈高表達(dá)表現(xiàn)，Corin在SUD者心肌組織中熒光強(qiáng)度顯著低于蛛網(wǎng)膜下腔出血、過(guò)敏性休克和機(jī)械性窒息死亡者心肌組織中熒光強(qiáng)度；（4）不明原因心臟性猝死者心肌組織中SLC26A6和Corin的RNA相對(duì)表達(dá)量均顯著異于蛛網(wǎng)膜