大黃魚(Pseudosciaena crocea)細胞色素P450 CYP4F7基因的克隆鑒定及其在病原疫苗和LPS刺激下組織表達特性研究.pdf

1、大黃魚((Pseudosciaena crocea)是我國海水傳統(tǒng)養(yǎng)殖中最重要的經(jīng)濟養(yǎng)殖魚類之一。細胞色素P450(Cytochrome P450)是細胞色素P450單加氧酶系的最重要組分之一,參與催化生物對內(nèi)源物質(zhì)和親脂性外源化合物的代謝過程。
　　 本研究是在本實驗室構(gòu)建的大黃魚消減雜交cDNA文庫中長623 bp的EST序列基礎(chǔ)上設(shè)計引物,以腹腔注射LPS的大黃魚肝臟mRNA為模板,采用RACE-PCR.的方法,克隆、鑒定

2、出細胞色素P450 CYP4F7基因cDNA全長序列。結(jié)果顯示:大黃魚CYP4F7cDNA全長1934bp,5'端非編碼區(qū)59 bp,3'端非編碼區(qū)264 bp,開放式閱讀框1611 bp,編碼含有536個氨基酸殘基的蛋白,推測的蛋白質(zhì)分子量為61.6 Kda。序列分析表明大黃魚的CYP4F7的氨基酸序列與舌齒鱸的同源性最高,達91％;與人CYP4F2的同源性為68％,與小鼠CYP4F4和家鼠CYP4F6分別為71％和67％。
　

3、　 采用RT-PCR方法研究了CYP4F7基因在對照組大黃魚、注射了溶藻弧菌滅活疫苗組大黃魚和注射了細菌脂多糖LPS(Lipopolysaccharide)的大黃魚各組織中的表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn):CYP4F7在各處理組大黃魚的脾、肝、心、頭腎、腎、鰓中均有表達,脾、肝組織中的表達水平高于頭腎、心、腎和鰓。在對照組和溶藻弧菌滅活疫苗組大黃魚的肌肉和腸組織中CYP4F7均有少量表達,而在LPS刺激組中未見表達。CYP4F7在LPS刺激組中的

4、表達量均顯著低于對照組,而溶藻弧菌滅活疫苗組刺激組則明顯高于對照組。采用RQ-PCR相對定量方法分析該基因在對照組和溶藻弧菌滅活疫苗刺激組織中的表達情況,所得結(jié)果同RT-PCR一致。
　　 上述結(jié)果說明:我們已經(jīng)首次成功克隆鑒定了大黃魚細胞色素P450CYP4F7基因。溶藻弧菌滅活疫苗的刺激增強了CYP4F7在大黃魚各組織中的表達;而CYP4F7在注射了LPS的大黃魚各組織中的表達量均低于正常的大黃魚各組織中CYP4F7的表達量