miR-137在小細胞肺癌獲得性多藥耐藥中的作用及機制研究.pdf

1、肺癌是全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一,且仍處于逐年上升的趨勢。在各種類型的肺癌中,小細胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)占15％-20%。SCLC癌細胞倍增時間短,進展快,常伴內分泌異常或類癌綜合癥。雖然SCLC患者對首次化療非常敏感,有效率高達80%,但是90%以上的患者會復發(fā),其中位生存期僅6-8個月,五年生存率僅3%-8%,并且這一現狀并沒有隨著新的化療藥物的出現和化療方案的改進而得到改善。SCLC患者

2、復發(fā)后表現出的獲得性多藥耐藥性(multidrug resistance,MDR)是化療失敗的最主要原因之一,也是長期困擾臨床SCLC化療的難題。
　　SCLC獲得性MDR機制比較復雜,大致分為內源性耐藥和獲得性耐藥,由多種基因參與和多種機制共同作用導致產生。微小RNA(micro RNA,miRNA)作為生物體內重要的基因調控因子,是目前生命科學領域研究的熱點之一。miRNAs不僅參與生物體正常的生理過程,在疾病發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮

3、著一定的作用。研究證實,miRNAs在肺癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲以及獲得性MDR中均起著一定的調控作用。
　　為了探討SCLC獲得性MDR機制,本研究對SCLC獲得性MDR細胞H446/CDDP及其親代H446細胞進行miRNAs深度測序后發(fā)現,miR-137在H446細胞中的表達水平顯著性高于H446/CDDP細胞。通過對H446細胞轉染miR-137inhibitor后發(fā)現,順鉑誘導轉染細胞的細胞凋亡率顯著下降;而對H446/CDD

4、P細胞轉染miR-137mimics后發(fā)現,順鉑誘導轉染細胞凋亡率卻顯著升高,與此同時,miR-137的靶蛋白--KIT的表達水平顯著下調。本研究結果揭示,miR-137可望成為逆轉SCLC獲得性MDR的一個潛在作用靶點。
　　目的:
　　探討miR-137在SCLC獲得性MDR中的作用及分子機制,為耐藥逆轉提供實驗依據和理論基礎。
　　方法:
　　1.運用miRNAs深度測序聯合real-timePCR的方法,

5、篩選SCLC獲得性MDR相關miRNAs。
　　2.運用瞬時轉染的方法,在干預H446和H446/CDDP細胞中miR-137表達的基礎上,通過檢測細胞周期、細胞凋亡及藥物敏感性等,探討miR-137在SCLC獲得性MDR中的作用機制。
　　3.運用Targetscan、miRanda及miRDB等軟件預測受miR-137調控的潛在下游靶基因。
　　4.采用蛋白印記(Western-blot)技術檢測miR-137下游

6、調控靶基因KIT的表達水平。
　　結果:
　　1.miRNAs深度測序發(fā)現,相對親代H446細胞,miR-137在H446/CDDP中的表達水平顯著性降低(P<0.01)。Real-timePCR結果進一步證實,miR-137在H446/CDDP中表達水平顯著性低于H446細胞(P<0.01)。
　　2.miR-137mimics轉染H446/CDDP細胞后可顯著上調H446/CDDP細胞中miR-137表達水平,并顯

7、著增加順鉑誘導的轉染細胞的細胞凋亡率(P<0.01)。
　　3.miR-137inhibitor轉染H446細胞后可顯著下調H446細胞中的miR-137表達水平,并顯著降低順鉑誘導轉染細胞的細胞凋亡率(P<0.01)。
　　4.Western-blot結果顯示,miR-137mimics可顯著性下調H446/CDDP細胞表達KIT蛋白水平(P<0.05)。
　　結論:MiR-137通過調控細胞凋亡參與SCLC獲得性M