miR-155調(diào)控椎間盤退變的在體驗(yàn)證.pdf

1、研究背景及目的:
　　椎間盤退變的分子機(jī)制這些年來一直未被弄清,但金屬基質(zhì)蛋白酶在退變過程中的作用得到廣泛認(rèn)可,其幾乎可以降解一切髓核細(xì)胞外基質(zhì)。有研究表明MicroRNAs可以通過抑制金屬基質(zhì)蛋白酶mRNA來控制其表達(dá)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)miR-155在退變的椎間盤髓核細(xì)胞中顯著下調(diào),而且miR-155已經(jīng)被證實(shí)可以調(diào)控金屬基質(zhì)蛋白酶16即MMP-16,所以我們假設(shè)miR-155通過對(duì)MMP-16的調(diào)節(jié)在椎間盤退變中發(fā)揮作用。在

2、這個(gè)實(shí)驗(yàn)中我們通過運(yùn)用針刺造模法建立椎間盤退變模型,將上述退變過程進(jìn)行在體驗(yàn)證。這是目前首次在體驗(yàn)證MMP-16在椎間盤退變過程中的作用,其目的是闡述miR-155通過調(diào)控MMP-16在椎間盤退變中的作用。
　　方法:
　　我們選取了臨床上55名椎間盤退變Pfirrmann分級(jí)II到IV級(jí)的患者,在手術(shù)摘取髓核30分鐘內(nèi)運(yùn)用real-time PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行定量分析,并運(yùn)用同樣的方法取5名尸體的正常椎間盤做定量分析進(jìn)行比

3、對(duì)。共選取90只C57小鼠運(yùn)用針刺法進(jìn)行椎間盤退變模型的制備。通過原位雜交和real-time PCR技術(shù)判定miR-155對(duì)MMP-16的調(diào)控作用和慢病毒是否可以穩(wěn)定轉(zhuǎn)染進(jìn)入小鼠椎間盤退變模型中,再通過影像學(xué)和組織學(xué)檢驗(yàn)評(píng)定椎間盤的退變程度。運(yùn)用HE染色和免疫組化技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)的變化。
　　結(jié)果:
　　通過本實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)退變的小鼠椎間盤中miR-155表達(dá)降低,通過上調(diào)miR-155的表達(dá)可以抑制MMP-16的表達(dá),M

4、MP-16的高表達(dá)可以促進(jìn)椎間盤的退變,MMP-16可以降解細(xì)胞外基質(zhì)中的II型膠原和聚集蛋白聚糖,慢病毒可以穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染C57小鼠的髓核細(xì)胞。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)第一次在活體體內(nèi)驗(yàn)證miR-155調(diào)節(jié)MMP-16的表達(dá)進(jìn)而驗(yàn)證其對(duì)椎間盤退變過程的影響。更加直觀和有力的證明了miR-155和MMP-16對(duì)于椎間盤退變的重要作用。上調(diào)miR-155可以抑制MMP-16的表達(dá),進(jìn)而可以減少髓核細(xì)胞外基質(zhì)中II型膠原和聚集蛋白聚