農(nóng)藥氟蟲腈作用下斑馬魚miR-155對UHRF1的調(diào)控作用.pdf

1、農(nóng)藥氟蟲腈對生物體具慢性神經(jīng)毒性，對生態(tài)環(huán)境具潛在的危險性。研究表明，miRNA在農(nóng)藥等化學物質(zhì)作用下，其表達發(fā)生改變，進一步與靶基因堿基互補配對，調(diào)控基因表達。實驗室前期的研究表明，用三唑磷微乳劑、氟蟲腈微乳劑及其混合物分別處理斑馬魚后，包括miR-155、miR-99在內(nèi)的21條miRNA的表達發(fā)生改變。miR-155是一個典型的多功能miRNA，miR-155參與血細胞生成、炎癥和免疫等多種生物學過程。因而通過實驗分析不同濃度氟蟲

2、腈等農(nóng)藥處理后，miRNA和相關(guān)靶基因在核酸和蛋白水平的表達，有助于明確miR-155和相關(guān)靶基因在外源化學物質(zhì)毒理學效應中的作用與關(guān)系。
　　 本論文以dre-miR-155為研究對象，通過生物信息學分析，對其靶標進行預測，結(jié)合互補“種子”序列、結(jié)合的自由能以及各數(shù)據(jù)庫中的排位等因素，選取miR-155潛在靶基因UHRF1為研究對象。UHRF1基因表達可促進乳腺癌細胞B-549的生長，且UHRFl蛋白在甲基化的調(diào)控過程、癌癥的

3、表觀遺傳學機制等生物學過程中具有重要作用。
　　 本實驗將斑馬魚分成8組，一組為空白對照，一組為溶劑（萬分之一DMSO）對照，其余6組斑馬魚分別用不同濃度氟蟲腈處理。采用熒光定量PCR技術(shù)研究miR-155及其潛在靶基因UHRF1在氟蟲腈處理前后的表達變化情況，結(jié)果表明，miR-155表達上調(diào)，則UHRF1表達下調(diào)，反之則上調(diào)。通過蛋白含量測定、Western blot及相關(guān)數(shù)據(jù)分析UHRF1蛋白處理前后表達情況，結(jié)果表明UHR

4、F1蛋白表達量隨miR-155表達的增加而減少。因此，miR-155可能對UHRF1蛋白的表達有負向調(diào)控作用。
　　 本實驗通過分析miR-155和UHRF1的轉(zhuǎn)錄水平與UHRF1在蛋白水平的表達的相關(guān)性，從核酸量、基因和蛋白水平研究miR-155對基因UHRF1的調(diào)控作用，對miR-155潛在靶基因UHRF1進行實驗驗證。這將豐富miRNA作為生物標記物來檢測化學物質(zhì)對環(huán)境影響的研究，同時為miRNA調(diào)控基因的表達以及在動物中