自殺基因修飾的內(nèi)皮祖細(xì)胞對(duì)小鼠原位移植性肝細(xì)胞癌的治療初探.pdf

1、[研究目的]
　　本課題研究自殺基因胞嘧啶脫氨酶(cytosine deaminase，CD)基因轉(zhuǎn)染的小鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)聯(lián)合酶前體藥物5-氟胞嘧啶（5-fluorocytosine，5-FC）對(duì)小鼠H22細(xì)胞原位移植性肝細(xì)胞癌的抑制作用。初步探討CD基因修飾的內(nèi)皮祖細(xì)胞聯(lián)合5-FC對(duì)小鼠原位移植性肝細(xì)胞癌的治療效果。
　　[研究方法]
　　1.

2、分離小鼠骨髓源性EPCs，培養(yǎng)鑒定后，采用Polybrene技術(shù)轉(zhuǎn)染含CD基因的慢病毒載體重組體plenti6.3-EGFP-CD至EPCs，熒光顯微鏡下觀察基因轉(zhuǎn)染情況。在不同濃度5-FC及不同作用時(shí)間下，利用CCK-8法檢測轉(zhuǎn)染CD基因的EPCs上清液聯(lián)合5-FC對(duì)肝癌H22細(xì)胞體外增殖能力影響。
　　2.腹水細(xì)胞法制作C57BL/6小鼠原位移植肝細(xì)胞癌模型，尾靜脈注射轉(zhuǎn)染CD基因的EPCs和5-FC聯(lián)合治療肝癌模型鼠，觀察移

3、植瘤體積重量變化，計(jì)算抑瘤率。TUNEL法檢測腫瘤凋亡，Western blotting檢測CD蛋白表達(dá)。
　　[研究結(jié)果]
　　1.成功轉(zhuǎn)染CD基因至EPCs，熒光顯微鏡下呈現(xiàn)綠色熒光。CCK-8法檢測顯示隨著5-FC濃度增加，經(jīng)CD基因轉(zhuǎn)染的EPCs上清液處理的H22細(xì)胞增殖逐漸下降，5-FC濃度達(dá)100 mg/L時(shí)，腫瘤細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到約（50.70±4.47）％(P＜0.05);隨著作用時(shí)間的延長，經(jīng)CD基因轉(zhuǎn)染的

4、EPCs上清液處理的H22細(xì)胞增殖明顯減少(P＜0.05)。
　　2.小鼠原位移植肝癌模型成瘤率為100％;轉(zhuǎn)染CD基因的EPCs實(shí)驗(yàn)組小鼠瘤體組織CD蛋白陽性表達(dá)，腫瘤生長受到抑制，腫瘤重量和體積抑制率分別為（45.81±9.92）％和（61.27±13.29）％(P＜0.05)，腫瘤細(xì)胞凋亡率為（39.98±5.13）％。
　　[結(jié)論]
　　CD基因修飾的EPCs聯(lián)合5-FC作用體外實(shí)驗(yàn)可抑制肝癌H22細(xì)胞增殖;尾