轉(zhuǎn)自殺基因的樹突狀細胞對移植小鼠cGVHD的調(diào)控作用.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)自殺基因的樹突狀細胞(DC)對供者淋巴細胞輸注誘導的cGVHD效應的影響，為臨床預防和治療cGVHD同時保留GVL效應探索新的方法。將BALB/C小鼠為供鼠，將其脾淋巴細胞輸注入對受鼠CB6F1小鼠體內(nèi)，行半相合移植，建立慢性GVHD模型。體外鑒定轉(zhuǎn)自殺基因的樹突狀細胞(TK-DC)的免疫耐受作用，并檢測在小鼠體內(nèi)成功植活、能誘導其自殺后，把TK-DC作用于慢性GVHD模型，研究該細胞對小鼠慢性GVHD的治療作用，并根據(jù)TK

2、-DC對GVHD效應的調(diào)控結果，啟動自殺基因，誘導細胞死亡，做到既能減輕慢性GVHD，又不削弱GVL效應的目的。
　　 方法:
　　 1.體外鑒定DC細胞的免疫耐受作用:用混合淋巴細胞反應鑒定DC細胞、轉(zhuǎn)自殺基因DC細胞(TK-DC)、TGF-β培養(yǎng)的DC細胞(TGFβ-DC)、TGF-β培養(yǎng)的轉(zhuǎn)自殺基因DC細胞(TGFβ-TK-DC)的誘導耐受功能，并用LPS刺激使各組DC成熟，觀察對T淋巴細胞的活化功能。
　　

3、 2.將TGFβ-TK-DC細胞經(jīng)尾靜脈輸注入小鼠體內(nèi)，于輸注后第1、15、30天應用流式細胞術檢測GFP熒光量，鑒定該細胞在小鼠體內(nèi)的植活。于輸注后第15天用更昔洛韋(GCV)腹腔注射，啟動TK基因，體內(nèi)誘導細胞自殺，第30天再次用流式細胞術檢測GFP熒光量，觀察體內(nèi)TGFβ-TK-DC數(shù)量的變化。
　　 3.建立半相合供者淋巴細胞輸注誘導的慢性GVHD模型:以親代BALB/C（H-2d，♂）為供鼠，以Balb/c×C57B

4、L/6 CB6F1（H-2d/b，♀）為受鼠行脾淋巴細胞半相合移植，建立慢性GVHD模型，通過混合淋巴細胞反應檢測T淋巴細胞的反應性，流式細胞術測定T細胞中分泌IL-4、IFN-γ的CD8+T細胞量，觀察cGVHD效應。
　　 4.建立TGFβ-TK-DC細胞治療慢性GVHD模型:移植后第25天應用該樹突狀細胞尾靜脈注射模型小鼠，同時設置TGFβ-DC對照組、空白對照組和環(huán)孢素A治療對照組，于移植后第40天再次觀察cGVHD效應

5、的改變。
　　 5.建立GCV治療慢性GVHD模型:于移植后第40天予各DC細胞治療組腹腔注射GCV（更昔洛韋）啟動自殺基因，同時設置腹腔注射注射用水對照組、空白對照組、環(huán)孢素A藥物停藥對照組，于移植后第55天再次觀察各組cGVHD效應的變化。
　　 結果:
　　 1.經(jīng)TGF-β培養(yǎng)后，TK-DC表現(xiàn)出明顯的致耐受性，其刺激淋巴細胞活化增殖的效應比普通TK-DC明顯減低。但TGF-β不能抵抗LPS對DC細胞刺激

6、成熟的作用。 TK-DC與DC的作用類似，證明轉(zhuǎn)入TK基因未對DC細胞的功能造成影響。
　　 2.在TK-DC細胞注入小鼠體內(nèi)后第30天，可以檢測到GFP熒光，表明TK-DC細胞成功植入。在更昔洛韋腹腔注射后小鼠體內(nèi)DC細胞較對照組明顯減少，說明更昔洛韋在體內(nèi)成功誘導TK-DC凋亡。
　　 3.移植后小鼠出現(xiàn)嘴角脫毛等cGVHD臨床表現(xiàn)，流式細胞術檢測體內(nèi)分泌IL-4的CD8+T細胞數(shù)量較正常小鼠明顯增高，提示造模成功。