基因修飾的人羊水祖細胞宮內(nèi)移植小鼠模型的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩98頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、血友病 B是由凝血因子 IX(FIX)缺乏所引起的 X連鎖隱性遺傳性出血疾病,需終生治療,且費用昂貴,因此人們希望通過基因治療來改善患者的癥狀。hFIX的表達不需要精確地調(diào)控,少量提高即可改善患者的出血癥狀,凝血因子的分泌無臟器特異性,因此血友病長期以來被認為是一種適合基因治療的疾病。
  多數(shù)針對出生后的個體的基因治療,效果不佳,大多在短期內(nèi)FIX的表達就下降了。近年來的研究表明,干細胞宮內(nèi)移植(In Utero Stem Ce

2、ll Transplantation,IUSCT)是克服移植免疫排斥反應(yīng)的一種有效途徑。在胎兒的免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟時,通過宮內(nèi)注射的方法將干細胞輸入到胎兒體內(nèi),使干細胞能在受體體內(nèi)歸巢并增殖分化,從而達到治療疾病的目的。干細胞作為基因的一種載體是研究的熱點之一,胚胎干細胞最具全能性,但由于倫理上的爭議限制了其使用。
  人們在羊水中發(fā)現(xiàn)了具有干性的胎兒細胞,這些細胞具有類似胚胎干細胞的功能,而沒有研究胚胎干細胞的倫理問題。為了使

3、羊水細胞宮內(nèi)移植能應(yīng)用到臨床實踐,首先需在動物體內(nèi)進行宮內(nèi)治療的實驗研究,通過建立羊水干細胞嵌合體動物模型來探討干細胞在體內(nèi)的各種生物學特征和功能,為宮內(nèi)治療的實施奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。
  首先,我們通過富含各種生長因子的培養(yǎng)液篩選貼壁的羊水細胞,再用機械分離的方法得到形態(tài)均一的羊水祖細胞(hAFPC),這種細胞呈長梭形,增殖速度快,并表達NANOG,SOX2,SSEA4和 TRA1-60等胚胎干細胞的特異性蛋白,經(jīng)誘導(dǎo)能成脂肪分

4、化和成骨分化。接著,我們構(gòu)建了hFIX和GFP共轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒,以慢病毒系統(tǒng)轉(zhuǎn)染了羊水祖細胞后使用流逝細胞儀篩選出 GFP陽性的細胞,進一步培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn),羊水細胞能夠在mRNA水平表達hFIX和GFP,并且在細胞上清液中檢測到了持續(xù)穩(wěn)定表達的FIX蛋白,以及與之相應(yīng)的FIX活性。由此我們證實羊水祖細胞轉(zhuǎn)染了hFIX片段后能夠持續(xù)合成有凝血活性的 hFIX。應(yīng)用改良的宮內(nèi)移植注射器,我們將這種基因修飾的羊水祖細胞移植到12.5d的胎鼠腹腔中,嵌

5、合率達到50%以上。移植的細胞主要歸巢到小鼠的肝臟和脂肪組織,其中肝臟中外源細胞的含量可達55.71±21.02%。出生3個月后仍能檢測到外源基因的表達。受體小鼠的外周血中我們也檢測到了高于1%的hFIX濃度,同樣可持續(xù)到出生后3個月。本研究為羊水來源的干細胞應(yīng)用于血友病B的產(chǎn)前治療提供了實驗基礎(chǔ),也為宮內(nèi)治療遺傳性疾病提供新的途徑。轉(zhuǎn)染了hFIX基因的羊水祖細胞可能成為血友病B基因治療的新型細胞來源
  本研究建立了分離和培養(yǎng)羊

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論