深圳地區(qū)HBV耐藥突變的高通量檢測及分子流行病學(xué)特征.pdf

1、目的：⑴分析不同濃度HBV-DNA對MALDI-TOF-MS檢測靈敏度的影響，建立慢性乙型肝炎患者HBV耐藥基因突變的高通量檢測方法。⑵統(tǒng)計分析深圳地區(qū)慢性乙型肝炎患者耐藥基因位點突變情況，闡明深圳地區(qū)慢性乙型肝炎患者分子流行病學(xué)特征。⑶比較長期使用核苷（類）似物治療的患者基因耐藥與臨床耐藥發(fā)生的相符情況，為慢性乙型肝炎患者臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：①根據(jù)慢性乙型肝炎防治指南，篩選2009年至2012年期間在深圳市

2、第三人民醫(yī)院進行耐藥基因檢測的2465例患者;根據(jù)MALDI-TOF-MS檢測結(jié)果、用藥情況及肝功能情況確定研究人群3例隨訪患者。②應(yīng)用DNA提取法、倍比稀釋法、實時熒光定量法、引物設(shè)計、質(zhì)譜檢測和醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)方法對慢性乙型肝炎患者進行HBV耐藥基因突變的高通量檢測及比較慢性乙型肝炎患者耐藥基因位點突變與臨床耐藥的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：⑴通過MALDI-TOF-MS檢測發(fā)現(xiàn)HBV DNA在103copies/ml水平也可檢測出突變

3、株，說明MALDI-TOF-MS技術(shù)具有較高的靈敏度。通過對血清進行系列梯度稀釋，發(fā)現(xiàn)HBV DNA在107～104copies/ml之間其野生株和突變株的峰面積比例恒定，說明MALDI-TOF-MS有較高的穩(wěn)定性。⑵在2465例慢性乙型肝炎患者中，共檢測到763例發(fā)生堿基突變，其中拉米夫定耐藥突變相關(guān)位點頻率最高，約42.96％，其突變位點主要為rtL180M(14.72％)，rtL204I(18.50％)，rtL204V(9.74％

4、);阿德福韋酯耐藥突變相關(guān)位點突變頻率約為8.19％，突變相關(guān)位點主要為rtN236T(4.15％);恩替卡韋耐藥突變相關(guān)位點突變頻率約為0.49％，在所有檢測標(biāo)本中，未發(fā)現(xiàn)rtS202I位點突變。⑶在核苷（酸）類似物治療過程中，動態(tài)隨訪的3例CHB患者，發(fā)現(xiàn)在檢測出核苷（酸）類似物相關(guān)突變位點的同時均出現(xiàn)HBV DNA的反彈及ALT升高，提示MALDI-TOF-MS突變位點的檢測和臨床耐藥高度一致，能及時準確的反應(yīng)耐藥情況。